中国农业科学院农业基因组研究所李奎获国家专利权
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龙图腾网获悉中国农业科学院农业基因组研究所申请的专利一种多基因碱基编辑载体及编辑方法和应用获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN119144652B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2026-01-13发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202411415041.7,技术领域涉及:C12N15/85;该发明授权一种多基因碱基编辑载体及编辑方法和应用是由李奎;黄雷;阮进学;李博设计研发完成,并于2024-10-11向国家知识产权局提交的专利申请。
本一种多基因碱基编辑载体及编辑方法和应用在说明书摘要公布了:本发明提供了一种多基因碱基编辑载体及编辑方法和应用,属于基因编辑技术领域。本发明提供了一种多基因碱基编辑的载体,通过利用复制子元件和U6及sgRNA串联的方式,可以使含复制子元件的质粒在细胞中持续存在,进而使得质粒上其它元件会在细胞内持续表达,从而提高多基因沉默的效率。本发明还提供了一种串联载体,即去除上述载体中的epi元件。本发明实施例中构建得到的两种多基因编辑载体对靶向位点都有沉默编辑作用,其中含epi元件的载体编辑效率更高。本发明通过药物富集筛选的方法,获得5基因沉默的纯合细胞系,为抗病育种提供了材料与方法。
本发明授权一种多基因碱基编辑载体及编辑方法和应用在权利要求书中公布了:1.一种靶向沉默多基因的方法,其特征在于,包括利用载体转化至目标细胞中,得多基因沉默细胞; 所述多基因为CALR、ANPEP、CD163、ANTXR1和MSTN; 所述载体的骨架载体内包括以下元件:单碱基编辑器、epi复制体元件和多U6串联或csy4串联; 所述载体中包括串联的复制子元件、U6启动子和针对每个目标基因的sgRNA;针对CALR设计的sgRNA为CALRsg1F和CALRsg1R,所述CALRsg1F的核苷酸序列如SEQIDNo.4所示,所述CALRsg1R的核苷酸序列如SEQIDNo.5所示;针对MSTN设计的sgRNA为MSTNsg4F和MSTNsg4R,所述MSTNsg4F的核苷酸序列如SEQIDNo.10所示,MSTNsg4R的核苷酸序列如SEQIDNo.11所示;针对ANPEP设计的sgRNA为ANPEPsg1F和ANPEPsg1R,所述ANPEPsg1F的核苷酸序列如SEQIDNo.12所示,ANPEPsg1R的核苷酸序列如SEQIDNo.13所示;针对ANTXR1设计的sgRNA为ANTXR1sg2F和ANTXR1sg2R,所述ANTXR1sg2F的核苷酸序列如SEQIDNo.20所示,ANTXR1sg2R的核苷酸序列如SEQIDNo.21所示;针对CD163设计的sgRNA为CD163sg4F和CD163sg4R,所述CD163sg4F的核苷酸序列如SEQIDNo.34所示,CD163sg4R的核苷酸序列如SEQIDNo.35所示; 其中每个U6启动子启动一个目标基因的sgRNA序列的表达; 所述复制子元件包括EBNA1和OriP。
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