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龙图腾网获悉中国人民解放军军事科学院军事医学研究院申请的专利一种快速无痕制备含长多聚腺嘌呤的mRNA的方法及应用获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN116004682B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2026-01-16发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202211001682.9，技术领域涉及：C12N15/66；该发明授权一种快速无痕制备含长多聚腺嘌呤的mRNA的方法及应用是由陈薇;杨益隆;徐俊杰;赵晓帆;张章;李煜;宰晓东;李耀辉;侯利华设计研发完成，并于2022-08-19向国家知识产权局提交的专利申请。

本一种快速无痕制备含长多聚腺嘌呤的mRNA的方法及应用在说明书摘要公布了：本发明公开了一种快速无痕制备含长多聚腺嘌呤的mRNA的方法及应用，通过模块化设计和IIS型限制性DNA内切酶系统，将包含长polyA的复杂基因合成分解为简单目的基因的快速合成和与预先制备的前导质粒无痕连接两个步骤。基于该方法合成的mRNA无需加尾操作即可携带固定长度的polyA，并且由于目的基因合成不涉及长polyA复杂片段，模板质粒制备速度和效率得到极大提高。所述质粒能够作为线性化模板直接用于长多聚腺苷脱氧核酸polyAmRNA的体外转录合成，IIS型限制性DNA内切酶系统无需在目的基因和polyA之间引入额外拼接序列，转录出的mRNA序列完全符合预期。

本发明授权一种快速无痕制备含长多聚腺嘌呤的mRNA的方法及应用在权利要求书中公布了：1.一种快速无痕制备含长多聚腺嘌呤的mRNA的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤： 1构建含有长多聚腺嘌呤的前导质粒，将由启动子、IIS型限制性内切酶A反向识别DNA片段、任意间隔片段、IIS型限制性内切酶A正向识别DNA片段、长多聚腺嘌呤、IIS型限制性内切酶B反向识别DNA片段串联而成的DNA片段插入前导质粒的多克隆位点获得含有长多聚腺嘌呤的前导质粒，其中，所述IIS型限制性内切酶A为DNA内切酶BsaI，所述IIS型限制性内切酶B为DNA内切酶BspQI； 2构建含有UTR和编码基因的前导质粒，将IIS型限制性内切酶A正向识别DNA片段正向识别片段、启动子3’端的DNA片段、5’UTR、编码基因、终止子、3’UTR、多聚腺嘌呤片段和IIS型限制性内切酶A反向识别DNA片段串联而成的DNA片段插入前导质粒的多克隆位点获得含有UTR和编码基因的前导质粒； 3以IIS型限制性内切酶A切割步骤1获得的所述含有长多聚腺嘌呤的前导质粒获得含有T7启动子和长多聚腺嘌呤的线性片段； 4以IIS型限制性内切酶A切割步骤2获得的所述含有UTR和编码序列的前导质粒获得含有5’UTR、编码基因、终止子、3’UTR的线性片段； 5将步骤3获得的含有启动子序列和长多聚腺嘌呤的线性片段和步骤4获得的含有5’UTR、编码基因、终止子、3’UTR的线性片段连接获得长多聚腺嘌呤mRNA模板质粒。

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