首都师范大学娄新徽获国家专利权
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龙图腾网获悉首都师范大学申请的专利一种检测甲基化半胱氨酸总量的方法和试剂盒获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN118818052B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2026-01-16发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202310432096.8,技术领域涉及:G01N33/68;该发明授权一种检测甲基化半胱氨酸总量的方法和试剂盒是由娄新徽;李金明;李晓奇设计研发完成,并于2023-04-21向国家知识产权局提交的专利申请。
本一种检测甲基化半胱氨酸总量的方法和试剂盒在说明书摘要公布了:本发明涉及一种检测甲基化半胱氨酸总量的方法和试剂盒,属于生物技术和分析测试领域。利用对游离Hcy具有高响应、对氧化态Hcy具有中等相应的核酸适配体构建倏逝波光纤传感器。荧光标记的互补链和tHcy与光纤上固定的核酸适配体竞争结合。荧光信号的下降值与血清中tHcy浓度正相关。根据荧光降低百分数来计算血清中的tHcy浓度。本发明检测tHcy仅需要1微升血清,将血清稀释1000倍后进行检测,检测结果与商业每循环法一致。与酶循环法相比,本发明方法具有价格低,光纤可重复使用30次以上、检测速度快,最快5分钟、不需要酶、设备小型化、操作简单等优点,具有极好临床应用价值。
本发明授权一种检测甲基化半胱氨酸总量的方法和试剂盒在权利要求书中公布了:1.一种检测甲基化半胱氨酸总量的方法,其特征在于,利用对游离Hcy具有高响应、对氧化态Hcy具有中等响应的核酸适配体构建倏逝波光纤传感器,该传感器基于竞争检测模式,荧光标记的互补链、还原态Hcy、氧化态Hcy与光纤上固定的核酸适配体竞争结合,还原态Hcy和氧化态Hcy的浓度越高,越多的光纤上固定的核酸适配体与其结合,与荧光标记的互补链结合的核酸适配体越少,荧光响应值越低,荧光信号的下降值与血清中tHcy浓度正相关,根据荧光降低百分数来计算血清中的tHcy浓度,另外,光纤界面上的吐温80纳米层对Hcy进行原位富集,极大地提高了光纤界面附近的还原态Hcy和氧化态Hcy的浓度,更加促进了其与光纤上固定的核酸适配体的结合,荧光响应值更低,因而检测灵敏度更高,将血清与还原剂三2-羧乙基膦的混合液在缓冲液中稀释1千倍,再加入终浓度为20nM的带Cy5.5修饰的核酸适配体互补链,经过以下三个步骤将混合物引入光纤传感器:1泵入缓冲液30秒清洗进样管道和光纤反应池,保证基线平稳;2耗时20秒将靶标和互补链的混合物泵入光纤反应池并保持180秒,实时测定荧光信号;3通入0.5%SDS,pH1.9洗涤缓冲液冲洗30秒,冲洗掉与光纤表面结合的互补链,重复1-3,进行下一个样品的检测,以tHcy浓度为横坐标,以相对荧光信号下降百分比为纵坐标绘制工作曲线,如前述的方法进行真实样本中tHcy的检测,根据荧光信号的响应值,利用工作曲线计算tHcy的浓度。
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