四川大学华西医院王廷华获国家专利权
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龙图腾网获悉四川大学华西医院申请的专利一种人尿源干细胞的培养方法获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN121022738B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2026-03-10发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202511577559.5,技术领域涉及:C12N5/0775;该发明授权一种人尿源干细胞的培养方法是由王廷华设计研发完成,并于2025-10-31向国家知识产权局提交的专利申请。
本一种人尿源干细胞的培养方法在说明书摘要公布了:本发明公开了一种人尿源干细胞的培养方法,涉及生物医药技术领域,其技术要点为:通过收集孕产妇尿液样本,采用明胶包被培养板、诱导贴壁、传代扩增、免疫荧光鉴定以及功能检测等优化条件分离并培养干细胞,与正常成年人的尿源性干细胞相比,孕妇来源的干细胞具有更强的活力、更高的干性及更快的增殖能力。本发明为组织工程和再生医学提供了一种新颖且优越的细胞来源。
本发明授权一种人尿源干细胞的培养方法在权利要求书中公布了:1.一种人尿源干细胞的培养方法,其特征是:所述方法包含以下步骤: S1、明胶包被培养板:将0.1%明胶溶液按0.5mL孔加入12孔板,于5%CO2培养箱中37℃孵育30min,弃去明胶液后备用; S2、尿液收集与离心沉淀:收集孕产妇中段尿液200mL,室温下离心400g,10min;弃去上清液,保留管底1mL尿液沉淀,加入10mLDPBS吹打混匀;再于1500rmin离心10min,弃上清,收集细胞沉淀;所述孕产妇中段尿液为产术后恢复期的产妇,在手术后24–72小时内,受试者恢复自主排尿后采集的尿液; S3、干细胞诱导形成与贴壁培养:取100μL沉淀,加入1mLUSCs完全培养基,以2×105细胞孔密度接种至明胶包被12孔板;置于37℃、5%CO2培养箱培养,48h后换液,弃去悬浮细胞,保留贴壁细胞;后每2-3d进行一次换液; S4、干细胞传代与扩增:待细胞贴壁面积达75%~80%时传代,弃去培养基,将其放置在生物安全柜中传代培养,加入0.25%胰酶-EDTA消化3min;加入等体积含10%FBS和1%双抗的高糖DMEM终止反应;以低速离心机1000rpm离心7min,收集沉淀;后按1:3比例转入新培养瓶扩增; S5:干细胞收集与实验前处理:将消化收集的细胞用含双抗PBS清洗1次,以低速离心机1500rpm离心7~10min,弃上清保留沉淀,再根据需要的浓度重悬于高糖培养基中,供动物实验或后续应用; S6:干细胞免疫荧光鉴定:采用CD90、CD44抗体对细胞进行免疫荧光染色,DAPI复染核,倒置显微镜下观察,结果显示孕妇来源USCs为CD90⁺CD44⁺表型; S7:CCK-8检测细胞活性并绘制生长曲线:将细胞以2~5×103个孔密度接种96孔板,连续培养7天,使用CCK-8试剂盒检测细胞OD值,绘制生长曲线;结果显示孕妇来源USCs活力与增殖能力显著高于正常成年人USCs。
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