西北大学陈林获国家专利权
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龙图腾网获悉西北大学申请的专利一种筛选群体感应抑制剂并同时确定其作用靶点的方法获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN115125283B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2026-03-17发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202210949631.2,技术领域涉及:C12Q1/02;该发明授权一种筛选群体感应抑制剂并同时确定其作用靶点的方法是由陈林;库丽娜;杨秦设计研发完成,并于2022-08-09向国家知识产权局提交的专利申请。
本一种筛选群体感应抑制剂并同时确定其作用靶点的方法在说明书摘要公布了:本发明属于生物医学技术领域,具体涉及一种用于铜绿假单胞菌群体感应系统抑制剂筛选以及同时确定抑制剂作用靶点的方法。包括:构建QS抑制剂筛选系统,且该QS抑制剂筛选系统以蛋白酶为筛选标志;构建蛋白酶基因缺失的突变体,其在共培养过程中提供QS信号分子;采用共培养或外源添加QS信号分子的方式,筛选出对QS系统具有抑制作用的化合物并确定该化合物的作用靶点。本发明建立了一种简单、快捷、有效的且可以用于高通量QSI筛选的方法,在筛选的同时能够确定其作用靶点。
本发明授权一种筛选群体感应抑制剂并同时确定其作用靶点的方法在权利要求书中公布了:1.一种筛选群体感应抑制剂并同时确定其作用靶点的方法,其特征在于,包括: 构建QS抑制剂筛选系统,且该QS抑制剂筛选系统以蛋白酶或发光报道子为筛选标志; 构建蛋白酶基因缺失的突变体,其在共培养过程中提供QS信号分子; 采用共培养或外源添加QS信号分子的方式,筛选出对QS系统具有抑制作用的化合物并确定该化合物的作用靶点; 其中,所述共培养是指将QS抑制剂筛选系统、蛋白酶基因缺失的突变体与化合物混合培养; 所述外源添加QS信号分子是指将QS抑制剂筛选系统、化合物与外源QS信号分子混合培养; 所述QS抑制剂筛选系统包括Las筛选系统、Rhl筛选系统和含发光报道子pKD-pqsA的Pqs筛选系统; 所述Las筛选系统的构建方法如下:通过同源重组方法,分别对JP2依次进行rhlR、pqsA、pqsR基因敲除,最终得到可以用于筛选Las系统抑制剂的菌株JP2ΔrhlRΔpqsAΔpqsR;所述JP2是将PAO1敲除lasI、rhlI两个基因后的菌株; 所述Rhl筛选系统的构建方法如下:通过同源重组方法,分别对JP2依次进行pqsA、lasR、pqsR基因敲除,最终得到可以用于筛选Rhl筛选系统抑制剂的菌株JP2ΔpqsAΔlasRΔpqsR; 所述Pqs筛选系统的构建方法如下:通过同源重组方法,分别对JP2依次进行rhlR、pqsA、lasR基因敲除,最终得到可以用于筛选Pqs筛选系统抑制剂的菌株JP2ΔrhlRΔpqsAΔlasR,将发光报告质粒pKD-pqsA转入只保留PqsR的JP2ΔlasRΔrhlRΔpqsA中,得到Pqs筛选系统; 蛋白酶缺失突变体为PAO1菌株的基础上得到的突变体ΔlasAΔlasBΔaprA,蛋白酶缺失突变体ΔlasAΔlasBΔaprA分别与QS抑制剂筛选系统、抑制剂共培养,验证抑制剂是否能起到抑制作用并确定其作用靶点。
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