南京中医药大学姚卫峰获国家专利权
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龙图腾网获悉南京中医药大学申请的专利一种铁皮石斛复合提取物的检测方法获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN118105439B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2026-03-17发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202410148724.4,技术领域涉及:G01N30/72;该发明授权一种铁皮石斛复合提取物的检测方法是由姚卫峰;张丽;赵炎设计研发完成,并于2024-02-02向国家知识产权局提交的专利申请。
本一种铁皮石斛复合提取物的检测方法在说明书摘要公布了:本发明公开了一种具有抗肺癌活性的铁皮石斛复合提取物及其制备方法,所述的铁皮石斛联苄提取物和铁皮石斛多糖的质量比为1:1~1:2。本发明制备得到的复合提取物可抑制Lewis肺癌肿瘤生长的,并且作用优于单独联苄或多糖类成分,起到了较好的协同增效的作用,有望制备成抗肺癌的药物。本发明还建立了石斛复合提取物的检测方法,可以很好的检测其质量。
本发明授权一种铁皮石斛复合提取物的检测方法在权利要求书中公布了:1.一种铁皮石斛复合提取物的检测方法,其特征在于,铁皮石斛复合提取物包括铁皮石斛联苄提取物和铁皮石斛多糖提取物; 铁皮石斛联苄类成分检测方法包括以下步骤: 1混合对照品溶液的制备 精密称定各对照品毛兰素、精氨酸、原儿茶醛、咖啡酸、槲皮素、原儿茶酸、花旗松素、松果菊苷、绿原酸、阿魏酸、没食子酸、芦荟大黄素和芦丁于容量瓶中,加入甲醇溶解并定容,配制成1mgmL的对照品储备液,4℃保存备用;临用前,取各对照品储备液适量配制成5μgmL的混合对照品溶液,4℃、13000rpm离心10min,并用0.22μm微孔滤膜过滤,取续滤液注入液质联用仪分析; 2供试品溶液的制备 称取20mg铁皮石斛联苄类提取物,加入甲醇2mL,超声溶解,13000rpm离心10min,并用0.22μm微孔滤膜过滤,取续滤液注入液质联用仪分析; 3色谱-质谱条件 3.1色谱条件 采用ACQUITYUPLC®BEHC18色谱柱:2.1mm×100mm,1.7μm,Waters,柱温40℃,正负离子模式下流动相均为0.1%甲酸水A和乙腈B,流速0.3mLmin,进样量3μL,梯度洗脱程序为:0~1.5min,2%~22%B;1.5~8.5min,22%~35%B;8.5~9.5min,35%~58%B;9.5~12.5min,58%~63%B;12.5~21min,63%~90%B;21~22.5min,90%B;22.5~23min,90%~2%B;23~25.5min,2%B; 3.2质谱条件 采用TOFMS-IDA-MSMS模式,电喷雾离子源ESI,正负离子模式下扫描,质量扫描范围mz100~1250;采用以下ESI参数:电喷雾电压ISVF为-4500VESI-5500VESI+,气帘气CUR为35psi,雾化气GS1为55psi,辅助气GS2为55psi,离子源温度550℃,去簇电DP为80V,TOF-MS模式下设置碰撞电压10V,IDA-MSMS条件下设置碰撞电压35V,碰撞电压差15V; 铁皮石斛多糖的含量测定包括以下步骤: 1对照品溶液的制备 精密称取无水葡萄糖对照品18.03mg于10mL容量瓶,用适量超纯水溶解并稀释至刻度,再取0.5mL稀释至10mL,制成每1mL中含0.09015mg无水葡萄糖的溶液,即得对照品溶液; 2供试品溶液的制备 称取铁皮石斛多糖提取物,转移至250mL容量瓶中,加纯水至刻度,摇匀;精密量取2mL定容后的提取液于15mL离心管中,加入无水乙醇10mL,摇匀后冷藏1h,取出,4000rmin离心20min,弃去上清液,沉淀加80%乙醇洗涤2次,每次8mL,离心,弃去上清液,沉淀加热水溶解,转移至25mL容量瓶中,放冷,加水补至刻度,摇匀,即得; 3标准曲线的制备 精密量取葡萄糖对照品溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL,分别置于10mL具塞试管中并加水补至1.0mL,精密加入5%苯酚溶液1mL,摇匀,再精密加入硫酸5mL,摇匀,置沸水浴中加热20min,取出,冰浴中冷却5min,以相应试剂为空白对照,在488nm的波长处测定吸光度,以吸光度为纵坐标y,葡萄糖浓度为横坐标x,绘制标准曲线,得到线性回归方程y=9.1926x+0.0075,相关系数R2=0.9986;结果表明:葡萄糖质量浓度在0.01803~0.09015mgml范围内,线性关系良好; 4测定方法 参照2020年版《中华人民共和国药典》中铁皮石斛多糖含量测定方法,量取供试品溶液1mL,置于10mL具塞试管中,按照“1.3标准曲线的制备”项下的方法,加入5%苯酚溶液1mL,测定吸光度,然后通过标准曲线并结合供试品溶液中无水葡萄糖的量,计算得到最终结果; ; 式中,Y为铁皮石斛多糖提取率%;C为标准曲线得出的多糖浓度参数mgmL;m为样品质量g; 所述铁皮石斛联苄提取物是通过以下方法制备得到: 取铁皮石斛干茎粉碎,按料液比1:22,采用体积浓度95%乙醇回流提取2次,每次提取时间为140min,即得; 所述铁皮石斛多糖提取物是通过以下方法制备得到: 取铁皮石斛乙醇提后药渣,按料液比1:50加水提取2次,每次提取1.5h,合并滤液,加乙醇至含醇量为80~90%,4℃静置24小时,过滤收集沉淀,Sevag法脱蛋白,即得。
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