江苏省农业科学院谭真真获国家专利权
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龙图腾网获悉江苏省农业科学院申请的专利一种御谷与狼尾草原生质体融合及其愈伤再生的方法获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN120173935B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2026-03-17发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202510339046.4,技术领域涉及:C12N15/02;该发明授权一种御谷与狼尾草原生质体融合及其愈伤再生的方法是由谭真真;钟小仙;钱晨;薛文韬设计研发完成,并于2025-03-21向国家知识产权局提交的专利申请。
本一种御谷与狼尾草原生质体融合及其愈伤再生的方法在说明书摘要公布了:本发明公开一种御谷与狼尾草原生质体融合及其愈伤组织再生的方法,包括以下步骤:步骤一,愈伤组织悬浮细胞培养:以御谷和狼尾草幼穗诱导颗粒状愈伤组织,建立愈伤组织悬浮细胞系;步骤二,原生质体分离和纯化:以悬浮细胞系为材料用酶解法进行原生质体分离,采用过滤‑离心法纯化原生质体;步骤三,原生质体融合和愈伤再生:利用电融合方法,将御谷原生质体和狼尾草原生质体进行融合;取融合后的原生质体,27~28℃避光散射光保湿培养,获得融合后原生质体的再生愈伤组织。本发明所涉及各步骤为一整套培养体系,各环节紧密连接形成一个整体,为狼尾草属种间原生质体融合再生植株获得奠定基础。
本发明授权一种御谷与狼尾草原生质体融合及其愈伤再生的方法在权利要求书中公布了:1.一种御谷与狼尾草原生质体融合及其愈伤组织再生的方法,其特征在于,所述方法包括以下步骤: 步骤一,愈伤组织悬浮细胞培养:以御谷和狼尾草幼穗诱导颗粒状愈伤组织,悬浮培养建立供受体高频胚性愈伤组织悬浮细胞系; 步骤二,原生质体分离和纯化:以悬浮细胞系为材料用酶解法进行原生质体分离,采用过滤-离心法纯化原生质体; 步骤三,原生质体融合和愈伤再生:利用电融合方法,将御谷和狼尾草原生质体按照1~5:1~5进行融合,取融合后的原生质体,27~28℃避光散射光保湿培养,获得融合后原生质体的再生愈伤组织; 所述步骤一中,诱导使用的诱导培养基为:MS+2mgL2,4-二氯苯氧乙酸+30gL蔗糖+3.75gL凝胶;悬浮培养使用的悬浮培养基为:MS+30gL蔗糖+50mLL椰汁+2mgL2,4-二氯苯氧乙酸;上述培养基用稀盐酸和氢氧化钠调整pH至5.7~5.8后,121℃高压灭菌20min; 所述步骤二中,酶解所用的酶解液组分如下:20gL纤维素酶R-10+6gL离析酶R-10+0.69gL2-N-吗啉乙磺酸一水合物+1.03gL二水合氯化钙+0.4M甘露醇,pH5.7~5.8,酶解时间6~8h; 所述步骤三中,电融合参数:交流电场强度20Vcm,交流电场作用时间25s,交流后持续时间7s;直流脉冲强度80Vcm,直流脉冲时间25s,直流脉冲间隔时间0.5s。
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