中国林业科学研究院林业研究所张冰玉获国家专利权
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龙图腾网获悉中国林业科学研究院林业研究所申请的专利一种渤丰3号杨无菌苗叶片基因编辑体系的建立方法获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN120758506B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2026-03-17发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202511024592.5,技术领域涉及:C12N15/113;该发明授权一种渤丰3号杨无菌苗叶片基因编辑体系的建立方法是由张冰玉;杨文华;褚延广;张明艳;苏晓华;李虹;范成明;胡赞民设计研发完成,并于2025-07-24向国家知识产权局提交的专利申请。
本一种渤丰3号杨无菌苗叶片基因编辑体系的建立方法在说明书摘要公布了:本发明公开了一种渤丰3号杨无菌苗叶片基因编辑体系的建立方法,属于组织培养及基因编辑技术领域。本发明通过5‑AU处理,建立和优化渤丰3号杨高效遗传转化体系,选择特异的sgRNAs靶点,构建编辑载体184kUV‑PDS1和184kUV‑PDS3,农杆菌转化渤丰3号杨无菌苗叶片,得到白化芽。本发明使用sgRNA1结合5‑AU预培养1d,在渤丰3号杨无菌苗叶片中实现了86.11%的遗传转化效率和53.13%的基因编辑效率。
本发明授权一种渤丰3号杨无菌苗叶片基因编辑体系的建立方法在权利要求书中公布了:1.一种渤丰3号杨无菌苗叶片遗传转化体系的建立方法,其特征在于,包括以下步骤: 1将渤丰3号杨无菌苗叶片在添加5-AU的预培养培养基上预培养1d; 2将预培养的渤丰3号杨无菌苗叶片放入宿主菌的菌液中进行侵染,得到侵染后的叶片; 3将所述侵染后的叶片正面向下平铺于共培养培养基中,暗培养;所述共培养培养基包括以下组分:MS粉4.41g·L-1+蔗糖30g·L-1+琼脂5g·L-1+6-BA0.5mg·L-1+NAA0.05mg·L-1; 4清洗暗培养后的叶片,吸干,转移叶片至筛选分化培养基中进行光照培养;获得叶片抗性芽; 5将所述叶片抗性芽切下转移至筛选生根培养基中进行筛选,得到白化不定芽; 其中,所述宿主菌为包含靶向敲除渤丰3号杨PDS基因的基因编辑载体的农杆菌GV3101; 所述基因编辑载体包括184kUV-PDS1基因编辑载体和184kUV-PDS3基因编辑载体;所述184kUV-PDS1基因编辑载体是由184kUV载体连接sgRNA1构成;所述184kUV-PDS3基因编辑载体是由184kUV载体连接sgRNA3构成; 所述sgRNA1的靶向结构域序列为5’-TTTGCAATGCCAAATAAGCC-3’; 所述sgRNA3的靶向结构域序列为5’-GAGAAAGTGAAGTTTGCAAT-3’; 所述暗培养的时间为2d; 所述预培养培养基包括以下组分:MS+6-BA0.5mg·L-1+NAA0.05mg·L-1+TDZ0.002mg·L-1+蔗糖30g·L-1+琼脂粉5g·L-1+5-AU3.2mmol·L-1; 所述筛选分化培养基包括以下组分:MS+6-BA0.5mg·L-1+NAA0.05mg·L-1+TDZ0.002mg·L-1+蔗糖30g·L-1+琼脂粉5g·L-1+Tim200mg·L-1+Cef200mg·L-1+Kan20mg·L-1; 所述筛选生根培养基包括以下组分:WPM+IBA0.02mg·L-1+蔗糖25g·L-1+琼脂粉5g·L-1+Tim200mg·L-1+Cef200mg·L-1+Kan15mg·L-1。
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