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中国农业科学院特产研究所邓效禹获国家专利权

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龙图腾网获悉中国农业科学院特产研究所申请的专利一种犬瘟热病毒微量中和抗体的筛选方法获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN117420310B

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2026-03-27发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202311308188.1,技术领域涉及:G01N33/577;该发明授权一种犬瘟热病毒微量中和抗体的筛选方法是由邓效禹;宿甲子;白雪;胡博;张蕾;张海玲;廉士珍设计研发完成,并于2023-10-10向国家知识产权局提交的专利申请。

一种犬瘟热病毒微量中和抗体的筛选方法在说明书摘要公布了:本发明公开了一种犬瘟热病毒微量中和抗体的筛选方法。该方法使用犬瘟热活病毒中和待检样品后,接种在vero‑slam细胞,以荧光病变作为判定标准。用病毒的真实构象检测中和抗体,可最高程度地保证检出中和抗体的真实性。以CDV阳性中和血清中和效价为1:708连续2倍梯度稀释成多浓度组作为待检样品,检测本发明方法对各稀释度血清的CDV中和活性检出率以及最低检测限。结果表明:CDV中和效价为1:708的血清稀释212倍后的中和活性是本发明方法的最低检测限,检出率为63.54±4.774%。本发明方法使用试剂品种少,且无昂贵试剂,成本低。本发明的提出为犬瘟热病毒微量中和抗体的筛选提供了新的技术手段。

本发明授权一种犬瘟热病毒微量中和抗体的筛选方法在权利要求书中公布了:1.一种犬瘟热病毒微量中和抗体的筛选方法,其特征在于,包括以下步骤: 1将中和效价为1:708的犬瘟热病毒阳性中和血清连续2倍梯度稀释210-212倍作为待检样品; 2接种Vero-Slam细胞前进行细胞计数,将细胞浓度稀释到1.5×105ml,再转移至无菌加样槽充分混匀,最后用排枪以100μl孔接种96孔板;在24小时内,待细胞覆盖面积达到90%以上进行攻毒; 3用含2%vvserum的2×DMEM将犬瘟热病毒CDV-OR12株病毒液连续10倍梯度稀释成4TCID500.1ml,分别与待检样品等体积混匀,37℃中和1h,待中和结束,将步骤2得到的96孔板Vero-Slam细胞以150μlPBS孔清洗一遍,再将各待检样品中和液以100μl接种1孔,37℃,5%CO2条件下72h,得到待检测96孔板Vero-Slam细胞; 4间接免疫荧光实验观察 待检样品中和接种72h后进行间接免疫荧光实验,具体步骤如下: 1待检测96孔板Vero-Slam细胞用pH7.2PBS清洗2遍:150μl孔,静止3min; 2固定:按照100μl孔加入固定液,静止作用20min;PBS清洗3遍:150μl孔,静止3min; 3封闭:按照100μl孔加入1%wvBSA,37℃作用1h; 4一抗孵育:将犬瘟热病毒单克隆抗体CDV-NP稀释到1μgml,50μl孔,37℃作用1.5h; 5PBS清洗3遍:100μl孔,静止3min; 6二抗孵育:兔抗鼠抗体按照1:500稀释,50μl孔,37℃作用1h;避光PBS清洗3遍:100μl孔,静止3min; 7细胞核染色:将DAPI染色液1:60稀释,50μl孔,避光室温作用15min;避光PBS清洗2遍:100μl孔,静止3min; 8荧光显微镜下观察,判定标准: 以孔内无阳性荧光为中和活性阳性标准,孔内出现阳性荧光为中和活性阴性标准。

如需购买、转让、实施、许可或投资类似专利技术,可联系本专利的申请人或专利权人中国农业科学院特产研究所,其通讯地址为:130112 吉林省长春市净月经济开发区聚业大街4899号;或者联系龙图腾网官方客服,联系龙图腾网可拨打电话0551-65771310或微信搜索“龙图腾网”。

以上内容由龙图腾AI智能生成。

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