成都市疾病预防控制中心;四川大学高绪芳获国家专利权
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龙图腾网获悉成都市疾病预防控制中心;四川大学申请的专利一种非疾病诊断或非治疗目的的奇异变形杆菌的快速检测方法获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN120366434B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2026-03-27发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202510522760.7,技术领域涉及:C12Q1/6844;该发明授权一种非疾病诊断或非治疗目的的奇异变形杆菌的快速检测方法是由高绪芳;帅培强;汪川;旷聃;鹿茸;江艺浩;王成;杜楠;翟一凡;覃芳葵设计研发完成,并于2025-04-24向国家知识产权局提交的专利申请。
本一种非疾病诊断或非治疗目的的奇异变形杆菌的快速检测方法在说明书摘要公布了:本发明涉及了快速检测方法的技术领域,具体涉及了一种非疾病诊断或非治疗目的的奇异变形杆菌的快速检测方法,首先,本发明通过分别将RPA反应体系和CRISPRCas12a反应体系放置在PCR反应管的管底和管盖内侧,避免了CRISPRCas12a与RPA的竞争作用,保证了反应速率和灵敏度,同时,因为无需开盖,也避免了核酸气溶胶污染的风险;其次,本发明提供的RPA通过优选的引物特异性扩增靶标DNA,CRISPRCas12a通过优选的crRNA特异性识别目标序列,在优选的反应条件下,通过RPA和CRISPRCas12a的双重筛选,可实现对奇异变形杆菌的快速、灵敏和特异性的检测,可靠性高,交叉反应性低,便于推广。
本发明授权一种非疾病诊断或非治疗目的的奇异变形杆菌的快速检测方法在权利要求书中公布了:1.一种非疾病诊断或非治疗目的的奇异变形杆菌的快速检测方法,其特征在于,包括 以下步骤: 将RPA预混液加入反应管的底部,CRISPRCas12a预混液置于反应管的管盖内侧,集于一管中; 从待测样本中提取DNA; 将提取的DNA加入反应管内与RPA预混液混合,关闭管盖,进行RPA扩增反应; 离心处理,将CRISPRCas12a预混液与RPA反应产物混合反应; 进行荧光法检测是否含有奇异变形杆菌的信号; 其中,RPA预混液包括RPA引物; RPA引物序列为:RPA-F:5’-GTCTGTCATCATCTCGATCCCTCTATTCCTG-3’,RPA-R:5’-ACGATTATTATCATTATCTGCGCTATCACCC-3’; CRISPRCas12a预混液包括crRNA和ssDNA信号探针; crRNA的序列为:5’-UAAUUUCUACUAAGUGUAGAUCCGCUGGUACCGGCAUCUGC-3’; ssDNA信号探针的序列为:5’-FAM-TTATT-BHQ-3’。
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