太原理工大学邸会霞获国家专利权
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龙图腾网获悉太原理工大学申请的专利一种同步联合检测外泌体蛋白的SERS传感平台及其制备方法获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN119198677B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2026-04-03发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202411383138.4,技术领域涉及:G01N21/65;该发明授权一种同步联合检测外泌体蛋白的SERS传感平台及其制备方法是由邸会霞;徐佩泽;雷洲昊;王亚迪;李芊玉设计研发完成,并于2024-09-30向国家知识产权局提交的专利申请。
本一种同步联合检测外泌体蛋白的SERS传感平台及其制备方法在说明书摘要公布了:本发明属外泌体蛋白检测的技术领域,提供一种同步联合检测外泌体蛋白的SERS传感平台及其制备方法,包括以下步骤:差速离心法对初始样品进行预处理;制备磁珠‑外泌体复合物,用不同SERS标签对外泌体表面的三种蛋白分别进行标记;在免疫磁珠‑外泌体复合物原位沉积银纳米颗粒;制备金膜阵列基底进行SERS检测,利用多级信号放大的SERS协同增强效应,得到外泌体上各蛋白对应的SERS信号。构建了一种集分离、富集和检测为一体的SERS传感平台用于外泌体蛋白的高灵敏检测。显著提高了外泌体与贵金属拉曼探针的结合效率,为同一样本中多重蛋白的同步联合检测提高了可行性。该方法检灵敏度高、特异性好,可实现外泌体蛋白的高通量检测。
本发明授权一种同步联合检测外泌体蛋白的SERS传感平台及其制备方法在权利要求书中公布了:1.一种同步联合检测外泌体蛋白的SERS传感平台的制备方法,其特征在于:包括如下步骤 1差速离心法对样品进行预处理:收集细胞上清液进行差速离心,依次在300g下离心10min,2000g下离心10min,10000g下离心30min,除去样品中残留的死细胞、细胞碎片、大囊泡杂质;所有差速离心步骤均在4℃下进行;将最后一步获得的上清液采用0.22μm的滤膜进行过滤,收集滤液备用; 2免疫金壳磁珠捕获外泌体:将1mL,10mgmLCD63抗体修饰的免疫金壳磁珠与50mL步骤1所得预处理后的样品进行混合,4℃下孵育2h,CD63抗体与外泌体表面的CD63蛋白特异性结合;将获得的混合物通过磁铁分离2min,得到磁珠-外泌体复合物MB-Au@Exo,分散于2.5mL的10mMPBS中; 3用不同拉曼标签同步标记多重外泌体蛋白:将1mM不同的拉曼报告分子与0.1mgmL相应的抗体分子进行偶联,作为拉曼标签,所述拉曼报告分子为4-巯基苯甲腈、4-硝基苯硫醇与4-乙炔基苯硫醇;所述抗体分子为EGFR抗体、GPC-3抗体与PD-L1抗体; 所述拉曼标签为:4-巯基苯甲腈—EGFR抗体,4-硝基苯硫醇—GPC-3抗体,4-乙炔基苯硫醇—PD-L1抗体;然后将相同浓度250μM的三种标签同时与1mL步骤2中所得磁珠-外泌体复合物进行共同孵育,4℃下孵育1h后,采用磁铁进行分离1min,将得到的粗产物用10mMPBS洗涤三次,分散于1mL,10mMPBS中; 4免疫磁珠-外泌体复合物原位沉积银纳米颗粒:在1mL步骤3所得的外泌体中,加入100μM,10μL的二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-巯基DSPE-PEG-SH,2k,在4℃下共同孵育30min,DSPE-PEG-SH插入外泌体脂质膜,得到巯基包覆的外泌体;再采用10mMPBS洗涤三次,重新分散于1mLPBS中;然后滴加10mM的稀氨水调节体系pH=10;再加入10μL,100mM硝酸银溶液与10μL,250mM抗坏血酸还原剂,混合均匀,37℃下孵育1h,在外泌体与金壳磁珠原位同时沉积银纳米颗粒,得到MB-Au@Exo@Ag; 5制备金膜SERS阵列基底:将尺寸为2cm×2.5cm的正电荷防脱载玻片置于10mL,3mM的氯金酸溶液中孵育5min,然后加入质量浓度为28%的浓氨水进行振荡反应1min,再用去离子水清洗3次,其中,氯金酸溶液与浓氨水的体积比为50:1;随后将该载玻片置于1mM的硼氢化钠溶液中孵育1min,生成浅红色的金纳米种子;再置于1mL,0.75mM氯金酸与1mL,0.75mM盐酸羟胺的等体积混合生长液中,室温下振荡反应10min,进一步形成大面积粗糙的、呈岛状分布的等离子体金膜;最后与柔性PDMS阵列孔进行组装,得到金膜SERS阵列基底; 6基于SERS协同增强效应检测外泌体蛋白:10μL步骤4所得MB-Au@Exo@Ag滴加到步骤5所得的金膜SERS阵列中,待样品干燥后,采用激光共聚焦拉曼光谱仪进行检测,得到外泌体蛋白所对应的拉曼信号。
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