杭州艾名医学科技有限公司张海峰获国家专利权
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龙图腾网获悉杭州艾名医学科技有限公司申请的专利一种肠类器官模型体外评价药物肠毒性的方法获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN121136913B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2026-04-03发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202511683277.3,技术领域涉及:C12N5/071;该发明授权一种肠类器官模型体外评价药物肠毒性的方法是由张海峰;王亚伟;游明亮;段彤设计研发完成,并于2025-11-17向国家知识产权局提交的专利申请。
本一种肠类器官模型体外评价药物肠毒性的方法在说明书摘要公布了:本发明提出了一种肠类器官模型体外评价药物肠毒性的方法,涉及生物医药领域。包括:配置6种不同的培养基,并用不同的培养基对hESC进行培育,诱导其分别进行定向内胚层细胞分化、后肠球分化、肠类器官分化和肠类器官成熟,并用制得的肠类器官模型来评价药物肠毒性。本发明制备的肠类器官模型与人体肠道细胞组成相似,既可以准确反映药物在人体内生理环境中的毒性作用,又能够大量重复获得、规避临床风险和伦理约束;还能够通过细胞活率反映不同肠毒性药物的敏感性,适合体外高通量药物肠毒性的快速评价。
本发明授权一种肠类器官模型体外评价药物肠毒性的方法在权利要求书中公布了:1.一种肠类器官模型体外评价药物肠毒性的方法,其特征在于,包括如下步骤: S1:配置分化培养基,包括配置分化培养基A1-A3、分化培养基B、分化培养基C1-C2;其中,分化培养基A1的组成成分为:终浓度为1X的RPMI1640培养基,以及150ngmL的ActivinA;分化培养基A2的组成成分在分化培养基A1的基础上,增加了0.2%的FBS;分化培养基A3的组成成分中,FBS的浓度为2%,其余和分化培养基A2一致;分化培养基B的组成成分包括终浓度为1X的DMEMF12培养基、2%的FBS、200ngmL的FGF4以及50ngmL的EGF;分化培养基C1的组成成分包括终浓度为1X的AdvancedDMEMF-12培养基、1X的HEPES、1X的N-2添加剂、1X的B-27™Plus补充剂、500ngmL的Rspo1、150ngmL的Noggin以及150ngmL的EGF;分化培养基C2的组成成分在分化培养基C1的基础上,额外增加了5ngmL的IL-2以及3μM的地塞米松; S2:选取干细胞,置于培养皿中复苏和传代培养;然后依次加入分化培养基A1-A3;所述干细胞为人胚胎干细胞或人诱导多能干细胞,且所述人胚胎干细胞不包括使用从经过体内发育的人胚胎分离或者获取的干细胞,也不包括使用从受精14天以上的人胚胎分离或者获取的干细胞; S3:清洗去除分化培养基A3,加入分化培养基B,静置培养;并按1天次的频率更换所述分化培养基B; S4:收集培养皿中的悬浮状3D后肠球,离心去除上清液、冰浴冷却后加入分化培养基C1和基质胶,接种,待胶滴凝固后再次加入分化培养基C1,静置培养;所述分化培养基C1和所述基质胶的比例为1:2,且静置培养期间按2天次的频率更换所述分化培养基C1; S5:用DPBS完全清洗去除分化培养基C1,加入分化培养基C2,静置培养12天,并按2天次的频率更换所述分化培养基C2,得到成熟的肠类器官模型; S6:先用所述分化培养基C2对药物进行稀释为100μM~1μM,将待测药物和所述肠类器官模型混合处理,静置反应48h;加入检测试剂,机械处理后测定细胞活率; 所述RPMI1640培养基、DMEMF12培养基、AdvancedDMEMF-12培养基中还包括补充剂和抗生素,所述补充剂为GlutaMAX™补充剂和B-27™Plus补充剂,所述抗生素为青霉素-链霉素混合液。
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