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龙图腾网获悉山东第一医科大学(山东省医学科学院)申请的专利一株高产棘白霉素B的工程菌株及其构建方法和应用获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN121182853B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2026-04-03发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202511713775.8，技术领域涉及：C12N15/80；该发明授权一株高产棘白霉素B的工程菌株及其构建方法和应用是由赵方龙;马酉初;李艳玲;张月;田园设计研发完成，并于2025-11-21向国家知识产权局提交的专利申请。

本一株高产棘白霉素B的工程菌株及其构建方法和应用在说明书摘要公布了：本发明公开了一株高产棘白霉素B的工程菌株及其构建方法和应用，属于基因工程技术领域。本发明通过CRISPRnCas9‑CBE技术对野生型构巢曲霉BGCm5进行改造，获得NHEJ缺陷NkuA突变及吡哆醇PyroA突变、核黄素RiboB突变营养缺陷型菌株。随后利用CRISPRCas9引入正交Lox位点，构建底盘细胞。通过CreLoxP和CreLox2272重组系统，将aniF、aniF2、aniG、aniH、aniI、aniK和odeA基因的组合过表达盒整合至基因组，获得系列工程菌株，显著提高了生产效率。

本发明授权一株高产棘白霉素B的工程菌株及其构建方法和应用在权利要求书中公布了：1.一株高产棘白霉素B的工程菌株的构建方法，其特征在于，对构巢曲霉进行改造，获得非同源末端连接缺陷、吡哆醇营养缺陷以及核黄素营养缺陷型菌株B-NPRm；随后利用CRISPRCas9引入正交Lox位点LoxPLox2272，构建底盘细胞菌株B-NPRm-2Lox；再通过CreLoxP和CreLox2272重组系统，分别将aniFaniF2aniGaniHaniIaniK基因以及aniJodeA基因的过表达盒整合至基因组，获得高产棘白霉素B的工程菌株； 所述的高产棘白霉素B的工程菌株的构建方法，包括如下步骤： S1，基于构巢曲霉构建具有非同源末端连接缺陷、吡哆醇营养缺陷以及核黄素营养缺陷型工程菌株B-NPRm； S2，将带有正交Lox位点LoxPLox2272的两个染色体着陆垫依次导入步骤S1获得的工程菌株B-NPRm中；并基于所得工程菌株构建AniJ过表达菌株CJOE； S3，构建Cre重组酶表达载体pUC-Cre以及用于过表达如下基因的CreLoxP重组供体载体：aniFaniFaniGaniHaniIaniK 并将以上载体共转入步骤S2获得的AniJ过表达菌株CJOE的LoxP位点中，获得过表达Ani基因的工程菌株； S4，构建CreLox2272重组介导OdeA过表达所需的供体载体，并将其与S3获得的Cre重组酶表达载体pUC-Cre共转入步骤S3获得的过表达Ani基因的工程菌株的Lox2272位点，获得高产棘白霉素B的工程菌株； 步骤S1中，构建含有丝状真菌复制元件、潮霉素B抗性基因、细菌复制元件、氨苄青霉素抗性基因、由构巢曲霉tef1启动子AnPtef1和终止子AnTtef1驱动的胞嘧啶编辑器编码序列以及分别靶向NkuAPyroARiboB基因的sgRNA的双功能载体，并将其转入构巢曲霉菌株BGCm5，以获得具有非同源末端连接缺陷、吡哆醇营养缺陷和核黄素营养缺陷型工程菌株B-NPRm； 步骤S2中，利用CRISPRCas9方法将带有正交Lox位点LoxP和Lox2272的两个染色体着陆垫依次导入步骤S1获得的工程菌株B-NPRm中两条不同染色体上的基因组DNA中，以获得构巢曲霉菌株B-NPRm-2Lox，可用于CreLoxP和CreLox2272重组； 步骤S2中，利用CRISPRCas9基因编辑方法，在获得的菌株B-NPRm-2Lox中将途径特异性调控因子编码基因aniJ的启动子替换为强启动子Ptef1，获得菌株CJOE，实现aniJ过表达； 步骤S2中，所述LoxP和Lox2272位点的整合通过同源重组供体载体实现，所述供体载体包含LoxP或Lox2272序列及同源臂； 步骤S3中，所述Cre重组酶表达载体pUC-Cre含有Ori元件、AmpR元件以及一个由构巢曲霉tef1启动子和终止子驱动的Cre重组酶表达盒。

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