湖南师范大学饶科获国家专利权
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龙图腾网获悉湖南师范大学申请的专利一种用于二长棘鲷多重PCR的SSR荧光标记引物及其应用获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN116219031B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2026-04-17发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202310046589.8,技术领域涉及:C12Q1/6888;该发明授权一种用于二长棘鲷多重PCR的SSR荧光标记引物及其应用是由饶科;郭梁;沈中源;于汪设计研发完成,并于2023-01-31向国家知识产权局提交的专利申请。
本一种用于二长棘鲷多重PCR的SSR荧光标记引物及其应用在说明书摘要公布了:本发明公开了一种用于二长棘鲷SSR多重PCR引物,包括10对特异性引物,分别为引物对Pae308、Pae654、Pae1218、Pae2027、Pae2333、Pae1291、Pae2105、Pae1271、Pae217和Pae347,其中每对引物由一个正向引物F和一个反向引物R组成;该引物多态性高,产物稳定,结果准确可靠;还公开了一种包括上述引物的试剂盒以及利用上述引物进行二长棘鲷鳍遗传多样性评估的方法,以及上述SSR多重PCR引物、试剂盒和方法在评估二长棘鲷遗传多样性和渔业资源开发保护中的应用。
本发明授权一种用于二长棘鲷多重PCR的SSR荧光标记引物及其应用在权利要求书中公布了:1.一种二长棘鲷鳍遗传多样性的评估方法,其特征是包括以下步骤: 1提取二长棘鲷DNA:采集二长棘鲷样品的鳍条组织,提取基因组DNA; 2合成特异性引物:筛选并合成10对特异性引物和2条荧光标记的通用引物M13和PQE-F,所述10对特异性引物和2条荧光标记的通用引物M13和PQE-F分为G1组和G2组,其中G1组包括引物对Pae308、Pae654、Pae1218、Pae2027、Pae2333和荧光标记的通用引物,G2组包括引物对Pae1291、Pae2105、Pae1271、Pae217、Pae347和荧光标记的通用引物; 所述通用引物M13和PQE-F的碱基序列分别如SEQIDNO:21~22所示; 3多重PCR扩增:利用步骤2中的两组特异性引物和荧光标记通用引物对步骤1中的基因组DNA进行PCR扩增,得到扩增产物; 4遗传多样性评估:对扩增产物进行基因分型,统计每个位点和个体的等位基因,根据杂合度指标比较遗传多样性; 步骤2中10对特异性引物,分别为引物对Pae308、Pae654、Pae1218、Pae2027、Pae2333、Pae1291、Pae2105、Pae1271、Pae217和Pae347,其中每对引物由一个正向引物F和一个反向引物R组成; 其中: 所述引物对Pae308的正、反向引物的碱基序列分别如SEQIDNO:1~2所示; 所述引物对Pae654的正、反向引物的碱基序列分别如SEQIDNO:3~4所示; 所述引物对Pae1218的正、反向引物的碱基序列分别如SEQIDNO:5~6所示; 所述引物对Pae2027的正、反向引物的碱基序列分别如SEQIDNO:7~8所示; 所述引物对Pae2333的正、反向引物的碱基序列分别如SEQIDNO:9~10所示; 所述引物对Pae1291的正、反向引物的碱基序列分别如SEQIDNO:11~12所示; 所述引物对Pae2105的正、反向引物的碱基序列分别如SEQIDNO:13~14所示; 所述引物对Pae1271的正、反向引物的碱基序列分别如SEQIDNO:15~16所示; 所述引物对Pae217的正、反向引物的碱基序列分别如SEQIDNO:17~18所示; 所述引物对Pae347的正、反向引物的碱基序列分别如SEQIDNO:19~20所示; 步骤3中PCR扩增时,G1组多重PCR扩增反应体系为: G1组PCR体系反应物 含量µL Pae308.F10µM 0.06 Pae308.R10µM 0.24 Pae654.F20µM 0.06 Pae654.R20µM 0.24 Pae1218.F10µM 0.06 Pae1218.R10µM 0.24 Pae2027.F5µM 0.06 Pae2027.R5µM 0.24 Pae2333.F5µM 0.06 Pae2333.R5µM 0.24 M1310µM 0.36 PQE-F10µM 0.36 BSA2mgmL 0.45 DNA50ngµL 2.0 TaqHSTakara 12.5 ddH2O 补足25µL ; G2组多重PCR扩增反应体系为: G2组PCR体系反应物 含量µL Pae1291.F20µM 0.06 Pae1291.R20µM 0.24 Pae2105.F10µM 0.06 Pae2105.R10µM 0.24 Pae1271.F20µM 0.06 Pae1271R20µM 0.24 Pae217.F10µM 0.06 Pae217.R10µM 0.24 Pae347.F10µM 0.06 Pae347.R10µM 0.24 M1310µM 0.36 PQE-F10µM 0.36 BSA2mgmL 0.45 DNA50ngµL 2.0 TaqHSTakara 12.5 ddH2O 补足25µL 。
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