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龙图腾网恭喜广东药科大学申请的专利一种基于CRISPR/Cas12a与DNAzyme的碱性磷酸酶活性检测方法获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN114965412B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-04-01发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202210621552.9，技术领域涉及：G01N21/64；该发明授权一种基于CRISPR/Cas12a与DNAzyme的碱性磷酸酶活性检测方法是由邹李;赖余芬设计研发完成，并于2022-06-02向国家知识产权局提交的专利申请。

本一种基于CRISPR/Cas12a与DNAzyme的碱性磷酸酶活性检测方法在说明书摘要公布了：本发明属于生物技术领域，具体涉及一种基于CRISPRCas12a与DNAzyme的碱性磷酸酶活性检测方法。本发明利用碱性磷酸酶特异性催化PPi焦磷酸的水解反应提高该方法对碱性磷酸酶的检测特异性，具体的：碱性磷酸酶催化PPi水解后，未被PPi络合的Cu2+可以辅助DNAzyme催化切割底物链。被切割的底物链不能进一步与Cas12acrRNA的二元复合物结合，CRISPRCas12a反式切割活性被沉默，不能裂解单链DNA报告探针，荧光被淬灭，通过DNA报告探针的荧光强度即可对碱性磷酸酶进行特异性分析。本发明方法操作简便、灵敏度高、选择性好，可用于检测多种生物活性物质中的碱性磷酸酶活性。

本发明授权一种基于CRISPR/Cas12a与DNAzyme的碱性磷酸酶活性检测方法在权利要求书中公布了：1.一种用于非诊断目的的基于CRISPRCas12a与DNAzyme的碱性磷酸酶活性检测方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、PPi水解：将不同活性浓度的碱性磷酸酶标准品与PPi、Cu2+以及缓冲溶液混匀后孵育，以水解PPi，使PPi无法与Cu2+结合；S2、DNAzyme切割：将Cu2+特异性DNAzyme与步骤S1得到的溶液混合，再加入抗坏血酸混匀后孵育，以充分切割底物链，所述DNAzyme包括底物链和酶链；S3、CRISPRCas12a反式切割：Cas12acrRNA复合物与步骤S2得到的溶液混匀，再加入切割缓冲溶液、二硫苏糖醇以及单链DNA报告探针混匀，继续孵育，使完整的底物链激活Cas12a蛋白反式切割活性，导致单链DNA报告探针断裂；S4、荧光分光光度计检测：CRISPRCas12a反式切割产物通过荧光分光光度计得到信号，根据信号值与活性浓度之间的关系构建标准曲线；S5、将待测样品代替标准品进行检测以获得荧光信号，根据待测样品的荧光信号值与标准曲线计算获得待测样品中的碱性磷酸酶活性。

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