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龙图腾网恭喜苏州市立医院申请的专利一种无RNA逆转录酶的miRNA一步法检测方法获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN118166080B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-04-04发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202410447524.9，技术领域涉及：C12Q1/686；该发明授权一种无RNA逆转录酶的miRNA一步法检测方法是由薛莹;赵国栋;王挺;黄超;乔龙威设计研发完成，并于2024-04-15向国家知识产权局提交的专利申请。

本一种无RNA逆转录酶的miRNA一步法检测方法在说明书摘要公布了：本发明属于分析检测技术领域，涉及一种无RNA逆转录酶的miRNA一步法检测方法，采用的PCRbuffer为10×PCRbuffer，包括0.1‑1.0M的Tris‑HCl，0.01‑0.05M的NH42SO4，0.1‑0.5M的KCl，0.01‑0.05M的MgCl2，0‑20％的甘油和0‑0.1M的DMSO。本发明提供了一种无RNA逆转录酶的RT‑qPCR一步法检测方法，可以实现miRNA的快速、低成本、无污染的检测。

本发明授权一种无RNA逆转录酶的miRNA一步法检测方法在权利要求书中公布了：1.无RNA逆转录酶的miRNA检测体系在制备消化道癌检测试剂中的应用，其特征在于，采用无RNA逆转录酶的miRNA检测体系，诱导TaqDNA聚合酶产生逆转录酶活性，分别检测miR-16,miR-93,cel-miR-39和miR-21四个miRNA；所述无RNA逆转录酶的miRNA检测体系包括PCRbuffer、TaqDNA聚合酶、逆转录引物、连接子、正向引物、荧光探针、dNTPs混合物和DEPC水；所述PCRbuffer为10×PCRbuffer，包括0.1-1.0M的Tris-HCl，0.01-0.05M的NH42SO4，0.1-0.5M的KCl，0.01-0.05M的MgCl2，0-20%的甘油和0-0.1M的DMSO；逆转录引物浓度为0.6µM，TaqDNA聚合酶的浓度为0.12UµL，连接子浓度为10nM，荧光探针浓度为0.1µM，正向引物浓度为0.4µM，dNTPs混合物浓度为0.2mM；miR-16正向引物序列如SEQIDNO.1所示，miR-16连接子的序列如SEQIDNO.2所示，miR-16逆转录引物的序列如SEQIDNO.3所示，miR-16荧光探针序列如SEQIDNO.4所示，cel-miR-39正向引物序列如SEQIDNO.1所示，cel-miR-39逆转录引物序列如SEQIDNO.5所示，cel-miR-39连接子序列如SEQIDNO.6所示，cel-miR-39荧光探针序列如SEQIDNO.7所示；miR-93正向引物序列如SEQIDNO.1所示，miR-93逆转录引物序列如SEQIDNO.8所示，miR-93连接子序列如SEQIDNO.9所示，miR-93探针序列如SEQIDNO.10所示，miR-21正向引物序列如SEQIDNO.1所示，miR-21逆转录引物序列如SEQIDNO.18所示，miR-21连接子序列如SEQIDNO.19所示，miR-93探针序列如SEQIDNO.20所示；反应程序如下：步骤1，95℃15分钟；步骤2，50℃30分钟；步骤4，95℃15秒，56℃30秒，70℃10秒，共45个循环；步骤5,4℃1分钟。

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