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龙图腾网恭喜南京大学申请的专利一种基于BRET的磷酸盐生物传感器、构建方法及其应用获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN114965403B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-04-04发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202210541471.8，技术领域涉及：G01N21/64；该发明授权一种基于BRET的磷酸盐生物传感器、构建方法及其应用是由张宴;余杰;任洪强设计研发完成，并于2022-05-18向国家知识产权局提交的专利申请。

本一种基于BRET的磷酸盐生物传感器、构建方法及其应用在说明书摘要公布了：本发明公开了一种基于BRET的磷酸盐生物传感器、构建方法及其应用，该生物传感器为由对磷酸盐特异性响应的铜绿假单胞菌磷酸盐结合蛋白PaPBP、纳米荧光素酶NanoLuc和黄色荧光蛋白VenusΔC10融合得到的融合蛋白，氨基酸序列如SEQIDNO.2所示；其中，铜绿假单胞菌磷酸盐结合蛋白PaPBP与纳米荧光素酶NanoLuc及黄色荧光蛋白VenusΔC10均通过柔性肽接头连接，铜绿假单胞菌磷酸盐结合蛋白PaPBP，氨基酸序列如SEQIDNO.1所示；本发明构建的生物传感器对磷酸盐具备极强的选择性，通过耦合生物发光共振能量转移技术，能够将磷酸盐浓度信号转换为比率荧光信号输出，实现对磷酸盐的快速、灵敏和高通量检测，该生物传感器适用于对自来水、地表水和城市污水等不同环境水体中磷酸盐检测。

本发明授权一种基于BRET的磷酸盐生物传感器、构建方法及其应用在权利要求书中公布了：1.一种基于BRET的磷酸盐生物传感器，其特征在于，所述生物传感器为由对磷酸盐特异性响应的铜绿假单胞菌磷酸盐结合蛋白PaPBP、纳米荧光素酶NanoLuc和黄色荧光蛋白VenusΔC10融合得到的融合蛋白，氨基酸序列如SEQIDNO.2所示；其中，所述铜绿假单胞菌磷酸盐结合蛋白PaPBP与纳米荧光素酶NanoLuc及黄色荧光蛋白VenusΔC10均通过柔性肽接头连接，所述铜绿假单胞菌磷酸盐结合蛋白PaPBP选自铜绿假单胞菌磷酸盐特殊转运系统Pst的周质亚基，去除周质前导序列，其氨基酸序列如SEQIDNO.1所示；所述柔性肽接头的氨基酸序列为GGT-GGS；所述黄色荧光蛋白VenusΔC10的氨基酸序列如SEQIDNO.3所示；所述纳米荧光素酶NanoLuc的氨基酸序列如SEQIDNO.4所示；所述基于BRET的磷酸盐生物传感器的构建方法，包括以下步骤：S1、质粒的合成：全基因合成黄色荧光蛋白VenusΔC10与由GGT-GGS柔性接头连接的纳米荧光素酶NanoLuc，以VenusΔC10-GGT-GGS-Nluc作为模板，进行PCR基因扩增，并克隆至pET-24b+载体，获得重组质粒pET-VenusΔC10-Nluc；全基因合成铜绿假单胞菌磷酸盐结合蛋白PstS，以其作为模板，进行PCR基因扩增，并插入pET-VenusΔC10-Nluc柔性接头GGT与GGS之间，获得重组质粒pET-VenusΔC10-PaPBP-Nluc；S2、转化与表达：将步骤S1构建的重组质粒pET-VenusΔC10-PaPBP-Nluc在表达载体大肠杆菌E.coliBL21DE3菌株中转化，并涂布在卡那霉素抗性LB平板中培养，待其长出菌落，每个菌落即为一个单克隆，挑选培养得到的单克隆菌株接种至卡那霉素抗性LB液体培养基中，培养至OD600=0.6~1.0，经IPTG诱导表达后，离心，收集细菌；S3、裂解与纯化：将收集的细菌重悬至TBS缓冲液中，向其中添加PMSF和溶菌酶，超声裂解，离心收集上清液，纯化，保存，得到生物传感器蛋白，即磷酸盐生物传感器。

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