烟台大学赵立军获国家专利权
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龙图腾网获悉烟台大学申请的专利一种基于环糊精-金刚烷化铱络合物主客体组装标记的蛋白标记物荧光检测方法获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN116183901B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-04-18发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202310006995.1,技术领域涉及:G01N33/533;该发明授权一种基于环糊精-金刚烷化铱络合物主客体组装标记的蛋白标记物荧光检测方法是由赵立军;祁彩霞;张彩梅设计研发完成,并于2023-01-04向国家知识产权局提交的专利申请。
本一种基于环糊精-金刚烷化铱络合物主客体组装标记的蛋白标记物荧光检测方法在说明书摘要公布了:本发明涉及一种基于环糊精‑金刚烷化铱络合物主客体组装标记的蛋白标记物荧光检测方法,属于有机铱络合物加氢催化技术在生物荧光传感领域的应用技术,为解决有机铱络合物加氢催化剂在生物应用中面临的易巯基失活等众多生物相容性问题,本发明采取了以下技术方案:(1)高催化加氢活性有机铱络合物、标记抗体共标记的纳米材料M的制备,通过调控材料组装过程中,标记抗体、β‑环糊精、封闭剂以及金刚烷功能化金属铱络合物的修饰顺序,成功解决了金属铱络合物在蛋白标记无检测中容易巯基失活的不可逆问题;(2)在载体上包被抗体A;(3)加入被测抗原生物蛋白标记物;(4)加入有机铱络合物、标记抗体共标记的纳米材料M;(5)加入含加氢调控探针的荧光检测液,铱络合物能够催化探针分子产生荧光信号变化,通过测试检测液的荧光强度变化可实现对待测生物蛋白标记物的定量检测。本技术实现了对生物蛋白标记物的快速、灵敏分析,具有操作简便、热稳定性好的优点。
本发明授权一种基于环糊精-金刚烷化铱络合物主客体组装标记的蛋白标记物荧光检测方法在权利要求书中公布了:1.一种基于环糊精-金刚烷化铱络合物主客体组装标记的蛋白标记物荧光检测方法,其特征在于,环糊精-金刚烷化铱络合物标记材料的制备步骤如下:1以金纳米颗粒AuNPs、银纳米颗粒AgNPs、聚苯乙烯微球PS或二氧化硅微球SiO2为载体,首先与标记抗体Ab1直接混合修饰或采用缩合剂活化后偶联,得到Ab1标记的纳米材料AuNPs@Ab1或AgNPs@Ab1或PS@Ab1或SiO2@Ab1;所述的缩合剂为1-乙基-3-二甲基氨基丙基碳二亚胺盐酸盐EDCI、N-羟基琥珀酰亚胺NHS;2将AuNPs@Ab1或AgNPs@Ab1或PS@Ab1或SiO2@Ab1进一步与巯基或双硫键或氨基功能化β-环糊精混合振荡2到24小时,接着采用封闭剂胎牛血清蛋白BSA或脱脂奶粉或酪蛋白或吐温进行孵化封闭后得到环糊精功能化的Ab1标记的金纳米颗粒AuNPs-Ab1@CD或AgNPs-Ab1@CD或PS-Ab1@CD或SiO2-Ab1@CD;3将AuNPs-Ab1@CD或AgNPs-Ab1@CD或PS-Ab1@CD或SiO2-Ab1@CD在金刚烷化铱络合物溶液中孵化1-24小时,得到环糊精-金刚烷主客体修饰的铱络合物标记纳米材料AuNPs-Ab1@CD@Ir或AgNPs-Ab1@CD@Ir或PS-Ab1@CD@Ir或SiO2-Ab1@CD@Ir;相应的蛋白标记物的分析包括如下步骤:4在载体酶标板或磁性纳米颗粒上负载包被抗体Ab2,并用封闭蛋白BSA进行孵化封闭,得到Ab2负载的载体材料S@Ab2;5在S@Ab2缓冲溶液中,加入待测蛋白AG,使待测蛋白AG与载体上的包被抗体Ab2特异性结合得到S-Ab2@AG;6在S-Ab2@AG中加入步骤3得到的铱络合物标记纳米颗粒AuNPs-Ab1@CD@Ir或AgNPs-Ab1@CD@Ir或PS-Ab1@CD@Ir或SiO2-Ab1@CD@Ir,实现铱络合物对待测蛋白AG的标记;7向步骤6得到的标记材料中,加入含有氧化还原荧光探针和氢源的荧光检测液,在0-100摄氏度温度,孵化反应0-120分钟后,测试溶液的荧光强度变化,从而实现对待测蛋白AG的定量检测;所述的氢源为甲酸或甲酸钠或甲酸钾或甲酸铵或甲酸三乙胺或还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸二钠盐NADH。
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