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龙图腾网恭喜复旦大学附属中山医院申请的专利带有HiBiT新型报告基因的肠道病毒感染性克隆及其构建方法和应用获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN116218907B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-04-22发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202310134693.2，技术领域涉及：C12N15/85；该发明授权带有HiBiT新型报告基因的肠道病毒感染性克隆及其构建方法和应用是由章树业;徐建青;张晓燕;喻锐设计研发完成，并于2023-02-20向国家知识产权局提交的专利申请。

本带有HiBiT新型报告基因的肠道病毒感染性克隆及其构建方法和应用在说明书摘要公布了：本发明公开了带有HiBiT新型报告基因的肠道病毒感染性克隆及其构建方法和应用，包括带有HiBiT新型报告基因的肠道病毒EVA71、CVA16、CVA10及CVA7感染性克隆，在EVA71、CVA16、CVA7及CVA10感染性克隆的基础上首次使用HiBiT作为报告基因，制备EVA71‑HiBiT、CVA16‑HiBiT、CVA7‑HiBiT及CVA10‑HiBiT感染性克隆，进一步通过感染性克隆拯救报告病毒，在体外通过细胞病变、空斑、WB、流式实验验证报告病毒的生物学活性及其遗传稳定性。本发明所涉及的病毒克隆或报告病毒在抗肠道病毒的药物以及中和抗体高通量筛选领域具有广泛应用价值。

本发明授权带有HiBiT新型报告基因的肠道病毒感染性克隆及其构建方法和应用在权利要求书中公布了：1.一种带有HiBiT新型报告基因的肠道病毒感染性克隆，包括：带有HiBiT新型报告基因的肠道病毒EVA71、CVA16、CVA10及CVA7感染性克隆，即EVA71-HiBiT、CVA16-HiBiT、CVA10-HiBiT及CVA7-HiBiT感染性克隆；其中：所述HiBiT新型报告基因的核酸序列如SEQIDNO.1所示；所述肠道病毒EVA71、CVA16、CVA10及CVA7的核苷酸序列分别如SEQIDNO.2-5所示；所述带有HiBiT新型报告基因的肠道病毒感染性克隆的构建方法包括：1）在5’UTR前添加T7RNA聚合酶启动子序列和锤头型核酶序列以及在3’UTR后添加polyA25尾巴，利用T7RNA聚合酶启动子，在体外获得mRNA，锤头型核酶提高病毒RNA的复制能力；2）在HiBiT序列的插入到病毒VP4第一位氨基酸后面，并在HiBiT序列的5’端添加VP4第二位到第四位氨基酸的同义突变序列，在HiBiT序列的3’端添加2A蛋白酶识别位点；所述EVA71-HiBiT、CVA16-HiBiT、CVA10-HiBiT及CVA7-HiBiT感染性克隆分别以EVA71、CVA16、CVA10及CVA7感染性克隆为基础，采用无缝克隆技术构建得到；其中：所述EVA71感染性克隆通过序列如SEQIDNO.6和SEQIDNO.7所示的上下游引物引入HiBiT序列；所述CVA16感染性克隆通过序列如SEQIDNO.8和SEQIDNO.9所示的上下游引物引入HiBiT序列；所述CVA10感染性克隆通过序列如SEQIDNO.10和SEQIDNO.11所示的上下游引物引入HiBiT序列；所述CVA7感染性克隆通过序列如SEQIDNO.12和SEQIDNO.13所示的上下游引物引入HiBiT序列；还包括胶回收正确的片段转入Trans2-Blue大肠杆菌感受态，摇菌，提质粒后测序验证，测序正确的质粒-20℃保存的步骤。

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