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龙图腾网恭喜郑州思昆生物工程有限公司申请的专利一种模板多核苷酸配对末端测序方法、试剂盒获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN114672546B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-04-22发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202011542076.9，技术领域涉及：C12Q1/6874；该发明授权一种模板多核苷酸配对末端测序方法、试剂盒是由王亚文;王玲玲设计研发完成，并于2020-12-24向国家知识产权局提交的专利申请。

本一种模板多核苷酸配对末端测序方法、试剂盒在说明书摘要公布了：本发明涉及基因测序技术领域，具体涉及一种模板多核苷酸配对末端测序方法、试剂盒。本发明对用于产生互补链的延伸引物进行特殊设计，形成至少由第一延伸引物、第二延伸引物连接为一体的延伸引物结构，并设计第一延伸引物在模板多核苷酸上的结合位点位于第二延伸引物结合位点的上游。在具有链置换活性的环境下，上游延伸引物的延伸链置换下游延伸引物的延伸链，被置换的下游延伸引物的延伸链通过第二延伸引物连接在第一延伸引物上，再通过第一延伸引物的延伸链结合在模板多核苷酸链上，再通过模板多核苷酸链固定在固体支持物上，提高互补链在循环测序环境中的稳定性，提高测序质量。

本发明授权一种模板多核苷酸配对末端测序方法、试剂盒在权利要求书中公布了：1.一种模板多核苷酸配对末端测序方法，其特征在于，包括以下操作步骤：S1、提供固定在固体支持物上的阵列的单链模板多核苷酸簇，加入第一测序引物，对单链模板多核苷酸至少部分序列进行测序，获得第一测序引物的延伸多核苷酸链和对应的第一末端序列信息；S2、去除第一测序引物的延伸多核苷酸链，加入延伸引物；其中延伸引物包括5’端通过linker结构连接为一体的第一延伸引物和第二延伸引物，模板多核苷酸上具有第一延伸引物的结合位点和第二延伸引物的结合位点；其中第一延伸引物的结合位点位于第二延伸引物结合位点的上游；S3、将延伸引物与模板多核苷酸退火杂交，在具有链置换反应活性的环境下，第一延伸引物产生的延伸链完全置换第二延伸引物产生的延伸链，被置换出的延伸链不与模板多核苷酸杂交结合，完全悬伸；S4、加入第二测序引物对第二延伸链的悬伸部分进行测序，获得对应的第二末端序列信息，完成模板多核苷酸的配对末端测序；第一延伸引物的Tm值低于第二延伸引物的Tm值，第一延伸引物与第二延伸引物的Tm值差值为5~10℃。

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