恭喜天津中合基因科技有限公司刘力沛获国家专利权
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龙图腾网恭喜天津中合基因科技有限公司申请的专利一种核酸标记的编码微球及其制备方法与应用获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN119464454B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-05-09发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202510058428.X,技术领域涉及:C12Q1/6806;该发明授权一种核酸标记的编码微球及其制备方法与应用是由刘力沛;张丰田;李从雨;程帅;逯晓云;孙隽设计研发完成,并于2025-01-15向国家知识产权局提交的专利申请。
本一种核酸标记的编码微球及其制备方法与应用在说明书摘要公布了:本发明公开了一种核酸标记的编码微球及其制备方法与应用。所述制备方法使用生物酶促反应合成核酸标记片段,通过生物酶的催化实现不同寡核苷酸的原位合成,从而提供足够的存储容量用于测序信息的编码。相较于化学法合成,该方法无需传统方法分段合成、连接、装配等复杂步骤,不仅提高了合成过程的效率和产率,降低了生产成本,还能增强核酸标记的特异性和稳定性。同时,生物酶的使用使得反应过程可在温和的条件下进行,不仅减少了副反应的发生,能在较短的时间内实现高效合成,还减少了对化学试剂的依赖,降低了环境污染的风险以及有害化学试剂的使用风险,从而使得条形码的合成过程更为可持续和安全。
本发明授权一种核酸标记的编码微球及其制备方法与应用在权利要求书中公布了:1.一种核酸标记的编码微球的制备方法,包括如下步骤:1)将区段1固定于微球,得到固定区段1的微球;所述区段1为长度是4-100bp的单链DNA;2)完成步骤1)后,将所述固定区段1的微球平均分为四个反应体系,分别加入酶促DNA合成反应体系1、酶促DNA合成反应体系2、酶促DNA合成反应体系3和酶促DNA合成反应体系4进行酶促反应,反应结束后离心,弃上清,收集微球沉淀;将全部微球沉淀混合后进行脱保护;脱保护完成后加入缓冲液重悬,得到重悬液;所述酶促DNA合成反应体系1由缓冲液、3-ONH2-dATP和TdT酶组成;所述酶促DNA合成反应体系2由缓冲液、3-ONH2-dTTP和TdT酶组成;所述酶促DNA合成反应体系3由缓冲液、3-ONH2-dGTP和TdT酶组成;所述酶促DNA合成反应体系4由缓冲液、3-ONH2-dCTP和TdT酶组成;3)完成步骤2)后,将所述重悬液重复步骤2)至少4次,得到连接区段1和区段2的微球;4)完成步骤3)后,将所述连接区段1和区段2的微球离心,弃上清;加入酶促DNA合成反应体系5进行酶促反应,反应结束后离心,弃上清,收集微球沉淀;将所述微球沉淀进行脱保护,脱保护完成后加入缓冲液重悬,得到重悬液;所述酶促DNA合成反应体系5由缓冲液、3-ONH2-dATP、3-ONH2-dTTP、3-ONH2-dGTP、3-ONH2-dCTP和TdT酶组成;5)完成步骤4)后,将所述重悬液重复步骤4)至少8次,得到连接区段1、区段2和区段3的微球;6)完成步骤5)后,将所述连接区段1、区段2和区段3的微球离心,弃上清;加入由缓冲液、dATP和TdT酶组成的反应体系进行反应,得到连接区段1、区段2、区段3和区段4的微球;所述核酸标记为单链DNA;所述区段1为通用序列,其5’端进行化学修饰,用于与微球共价结合;所述区段2的长度为4-16bp;所述区段3的长度为8-16bp;所述区段4为长度是10-60bp的polyT尾;所述微球的粒径为1-300µm。
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