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龙图腾网恭喜云南省热带作物科学研究所申请的专利一种澳洲坚果花粉管生长行为观测方法获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN115014903B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-05-16发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202210758660.0，技术领域涉及：G01N1/28；该发明授权一种澳洲坚果花粉管生长行为观测方法是由孔广红;余文才;柳觐;贺熙勇;倪书邦设计研发完成，并于2022-06-30向国家知识产权局提交的专利申请。

本一种澳洲坚果花粉管生长行为观测方法在说明书摘要公布了：本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种澳洲坚果花粉管生长行为观测方法。具体包括如下步骤：1将授粉后的雌蕊浸没于固定液中固定；2将雌蕊浸泡于酒精溶液中，然后洗涤；3将雌蕊与NaOH溶液混合软化、洗涤、吸干水分；4将雌蕊浸泡在磷酸缓冲液中；5将雌蕊于中间位置进行横切，使雌蕊上半部柱头与下半部子房分开，然后再纵切成两半，再次放入磷酸缓冲液中浸泡；6将雌蕊吸干水分后用染色剂染色、镜检。本发明的荧光显微方法极大地弱化了雌蕊自身组织发光的现象，容易获得花粉管在雌蕊内生长的高清晰度影像，对花粉管生长行为的呈现效果非常理想，可用于澳洲坚果品种间杂交亲和性评价，实际应用价值高。

本发明授权一种澳洲坚果花粉管生长行为观测方法在权利要求书中公布了：1.一种澳洲坚果花粉管生长行为观测方法，其特征在于，包括如下步骤：（1）将授粉后的雌蕊浸没于固定液中固定；（2）将步骤（1）得到雌蕊浸泡于酒精溶液中，然后洗涤获得洗涤后的雌蕊；（3）将步骤（2）得到洗涤后的雌蕊与NaOH溶液混合软化、洗涤、吸干水分；（4）将步骤（3）得到雌蕊浸泡在磷酸缓冲液中；（5）将步骤（4）得到雌蕊于中间位置进行横切，使雌蕊上半部柱头与下半部子房分开，然后再纵切成两半，再次放入磷酸缓冲液中浸泡；（6）将步骤（5）得到雌蕊吸干水分后用染色剂染色、镜检；所述步骤（3）不同授粉时期的雌蕊软化时间不同，雌蕊授粉后1～3d，软化时间为2h；雌蕊授粉后4～7d，软化时间为3h；雌蕊授粉后8～12d，软化时间为4h；步骤（1）所述固定液包括酒精溶液、冰醋酸和甲醛；所述酒精溶液、冰醋酸和甲醛的体积比为84～94：4～8：3～7；所述酒精溶液的体积分数为55～65％；步骤（1）所述固定液与雌蕊的体积比为15～25:1；所述固定的时间为42～54h；步骤（3）所述的NaOH溶液的浓度为1.5～2.5molL；所述NaOH溶液和雌蕊的体积比为35～45:1；步骤（2）依次使用体积分数为55~65%、35~45%、15~25%的酒精溶液浸泡雌蕊；雌蕊在每一种浓度的酒精溶液的浸泡时间独立为8～12min。

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