恭喜山东第一医科大学(山东省医学科学院)王昕宇获国家专利权
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龙图腾网恭喜山东第一医科大学(山东省医学科学院)申请的专利一种唾液斑DNA、RNA和蛋白质同时提取的方法获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN115287283B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-05-23发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202211131689.2,技术领域涉及:C12N15/10;该发明授权一种唾液斑DNA、RNA和蛋白质同时提取的方法是由王昕宇;严江伟;方晨;周鹏;李敏;许晓群;王盈;郭艺琳;孟德萍;于春江;熊若彤;王嘉慧设计研发完成,并于2022-09-16向国家知识产权局提交的专利申请。
本一种唾液斑DNA、RNA和蛋白质同时提取的方法在说明书摘要公布了:本发明提供了一种唾液斑DNA、RNA和蛋白质同时提取的方法,属于生物技术领域。本发明所述方法的步骤包括:1将唾液斑放于含有裂解缓冲液的反应体系中,得到裂解产物;2离心裂解产物,收集裂解上清液,依次流经DNA吸附柱、RNA吸附柱,收集吸附有DNA的吸附柱和吸附RNA的吸附柱以及最后流RNA吸附柱的过柱液体;3将所述含有DNA的吸附柱,所述含有RNA的吸附柱和第一次过RNA吸附柱的滤液分别纯化,得到DNA溶液、RNA溶液和蛋白质溶液。经检测结果显示,对获得的DNA、RNA和蛋白质样本进行STR分型、荧光定量PCR、ELISA唾液淀粉酶均可检测出相应浓度的样本,且最少唾液用量为10μL。
本发明授权一种唾液斑DNA、RNA和蛋白质同时提取的方法在权利要求书中公布了:1.一种唾液斑DNA、RNA和蛋白质同时提取的方法,其特征在于,包括如下步骤:1将唾液斑与裂解液混合,震荡得裂解物;2将裂解物13000rpm离心10~20min,取裂解物上清液,加入DNA吸附柱,离心DNA吸附柱,收集去除DNA的上清液;将离心后的DNA吸附柱进行DNA纯化处理,得DNA溶液;3将所述去除DNA的上清液与无水乙醇混合,然后加入RNA吸附柱,离心RNA吸附柱,收集去除RNA的上清液;将离心后的RNA吸附柱进行RNA纯化处理,得RNA溶液;4将所述去除RNA的上清液与缓冲液APP混合离心,去除上清液后加入乙醇离心,得蛋白质沉淀,将蛋白质沉淀溶解于PBS中,即得蛋白质溶液;步骤1所述唾液斑需剪碎至≤0.5cm2;步骤2所述离心DNA吸附柱的条件为10000~15000rpm离心20~40s;所述DNA纯化处理包括如下步骤:向步骤2所述离心后的DNA吸附柱中加入抑制物去除液IR,离心弃上清液,加入漂洗液WB,离心弃上清液;取离心后的DNA吸附柱,加入20~80μL洗脱缓沖液EB,离心收集含DNA的上清液,保留DNA吸附柱;将含DNA的上清液重新加入保留的DNA吸附柱中,离心,即得DNA溶液;步骤3所述无水乙醇的加入量为去除DNA的上清液的1~1.5倍;所述RNA纯化处理包括如下步骤:将步骤3所述离心后的RNA吸附柱用漂洗液清洗,离心得漂洗后的RNA吸附柱,加入5~15μLRNasefreewater,室温放置后离心,保留RNA吸附柱,得含RNA的上清液;将含RNA的上清液重新加入保留的RNA吸附柱中,室温放置后离心,即得RNA溶液;在加入RNasefreewater前,先将漂洗离心后的RNA吸附柱晾干处理;所述含RNA的上清液重新加入量为8~12μL;步骤4所述乙醇为60~80%的乙醇水溶液,所述乙醇的加入量为0.3~0.7mL;步骤4所述PBS溶液的加入量为80~120μL。
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