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龙图腾网恭喜中国科学院微生物研究所申请的专利一种双sgRNA结合RecET系统敲除盐单胞菌DNA大片段的方法获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN114717233B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-06-20发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202110011391.7，技术领域涉及：C12N15/113；该发明授权一种双sgRNA结合RecET系统敲除盐单胞菌DNA大片段的方法是由韩静;向华;徐桐;陈国强设计研发完成，并于2021-01-06向国家知识产权局提交的专利申请。

本一种双sgRNA结合RecET系统敲除盐单胞菌DNA大片段的方法在说明书摘要公布了：本发明公开了一种双sgRNA结合RecET系统敲除盐单胞菌DNA大片段的方法。本发明公开的敲除盐单胞菌DNA大片段的方法中，所敲除DNA大片段大于等于10kb，该方法包括：将具有如下1‑4特征的重组载体导入出发盐单胞菌中，实现DNA大片段的敲除；1能转录sgRNA1与sgRNA2，sgRNA1与sgRNA2分别靶向所敲除DNA大片段的两端；2含有出发盐单胞菌中所敲除DNA大片段的上游同源臂和下游同源臂；3能表达Cas9；4能表达RecE蛋白质和RecT蛋白质。本发明解决了目前盐单胞菌中无法实验大片段DNA敲除的问题，具有广泛的应用前景。

本发明授权一种双sgRNA结合RecET系统敲除盐单胞菌DNA大片段的方法在权利要求书中公布了：1.一种敲除盐单胞菌DNA大片段的方法，所述DNA大片段为50kb，所述方法包括：将重组载体导入出发盐单胞菌中，实现所述DNA大片段的敲除； 所述重组载体为重组载体1和重组载体2，所述重组载体1为在出发载体中插入序列表中序列1的第21-320位所示的DNA片段和出发盐单胞菌中所述DNA大片段的上游同源臂和下游同源臂得到的重组载体； 所述重组载体2为向另一能表达Cas9的出发载体中插入RecE蛋白质和RecT蛋白质的表达盒得到的重组载体，所述重组载体2含有序列2所示的DNA片段，序列2的第22-306位为araBAD启动子序列，第341-2941位为RecE基因序列，第2934-3743位为RecT基因序列，所述RecE基因序列编码序列3所示的RecE蛋白质，所述RecT基因序列编码序列4所示的RecT蛋白质； 所述出发盐单胞菌为盐单胞菌（Halomonasbluephagenesis）TD1.0。

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