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申请/专利权人：湖北工业大学

摘要：本发明涉及微生物分离技术领域，尤其涉及一种降解阿特拉津及纤维素的细菌的筛选方法。一种降解阿特拉津及纤维素的细菌的筛选方法，包括步骤：取常年落有草木、秸秆、落叶的森林土壤，采用浓度梯度法接种于富集培养基上，培养直至出现单菌落，转移至羧甲基纤维素为唯一碳源平板上进行纯化，直至出现单菌落；2将单菌落在羧甲基纤维素为唯一碳源平板上连续传代；3单菌落转移至以微晶纤维素粉为唯一碳源平板上，直至出现单菌落，连续传代；4将单菌落通过平板划线法转移至阿特拉津定向筛选培养基上，培养至单菌落出现；5扩增单菌落的16SrDNA，将16SrDNA比对鉴定，比对后为细菌菌属的保留。

主权项：1.一种降解阿特拉津及纤维素的细菌的筛选方法，包括步骤：1富集培养：取我国长白山地区常年落有草木、秸秆、落叶的森林土壤溶于葡萄糖和羧甲基纤维素混合水溶液中制成土壤悬液，将土壤悬液采用浓度梯度法接种于富集固体培养基上，培养直至出现单菌落，将单菌落采用平板划线法转移至以羧甲基纤维素为唯一碳源的羧甲基纤维素固体培养基上进行纯化，直至出现单菌落；其中，葡萄糖和羧甲基纤维素混合水溶液的配方：0.1g葡萄糖、0.5gNaCI、0.5g蛋白胨、0.25g酵母粉、0.2羧甲基纤维素，100ml双蒸水定容；富集固体培养基的配方为：0.1gNaNO3、0.02gCaCl2、0.5gKH2PO4、0.4gMgSO4.7H2O、0.01gFeSO4.7H2O、1g葡萄糖、5gNaCl、5g蛋白胨、2.5g酵母粉、15g琼脂，pH7.0～7.2，1L双蒸水定容，115℃灭菌；羧甲基纤维素固体培养基的配方：0.1gNaNO3、0.02gCaCl2、0.5gKH2PO4、0.4gMgSO4.7H2O、0.01gFeSO4.7H2O、3g羧甲基纤维素钠、15g琼脂，pH7.0～7.2，1L双蒸水定容，121℃灭菌20min；2复筛：将羧甲基纤维素固体培养基上的单菌落连续转移传代3～5次，至菌落稳定生长；3纤维素降解定向筛选：将步骤2得到的单菌落转移至以微晶纤维素粉为唯一碳源的微晶纤维素固体培养基上，直至出现单菌落，连续传代3～5次，至菌落稳定生长；其中，微晶纤维素固体培养基的配方：0.1gNaNO3、0.02gCaCl2、0.5gKH2PO4、0.4gMgSO4.7H2O、0.01gFeSO4.7H2O、3g微晶纤维素粉、15g琼脂，pH7.0～7.2，1L双蒸水定容，121℃灭菌20min；4阿特拉津降解定向筛选：将步骤3得到的单菌落通过平板划线法转移至阿特拉津定向筛选固体培养基上，培养至单菌落出现，将阿特拉津定向筛选固体培养基上生长的单菌落传代5代，稳定遗传的菌株保存至-80℃待用；其中，阿特拉津定向筛选固体培养基的配方：磷酸氢二钾0.2gL、硫酸镁0.1gL、氯化钠1gL、氯化钙0.2gL、柠檬酸三钠0.5gL、硫酸亚铁0.002gL、硫酸锌0.002gL、阿特拉津0.5gL，pH7.0～7.2，1L双蒸水定容，121℃灭菌20min；5菌种鉴定：扩增步骤4得到的单菌落的16SrDNA，将16SrDNA通过BLAST与EZbiocloud比对鉴定，比对后为细菌菌属的保留，其他真菌菌属舍弃。

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百度查询： 湖北工业大学 一种降解阿特拉津及纤维素的细菌的筛选方法