买专利卖专利找龙图腾，真高效！ 查专利查商标用IPTOP,全免费！专利年费监控用IP管家,真方便！

申请/专利权人：华中农业大学

摘要：一种香桧烯合酶及其编码基因和应用。本发明涉及一种香桧烯合酶，该蛋白质具有SEQIDNO:1所示的氨基酸序列；或该蛋白质具有在SEQIDNO:1所示的氨基酸序列基础上缺失、置换、插入或添加一个至几个氨基酸的衍生序列且该蛋白质具有香桧烯合酶活性。该香桧烯合酶能够催化香桧烯的合成，且催化效率高。

主权项：1.一种香桧烯合酶，其特征在于，该香桧烯合酶的氨基酸序列如SEQIDNO:1所示。

全文数据：一种香桧烯合酶及其编码基因和应用技术领域本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种香桧烯合酶及其编码基因和应用。背景技术柑橘中富含挥发性物质，大多数种质中挥发性萜烯类物质占总挥发性物质的90％以上。挥发性萜烯类物质主要存储在柑橘油胞中，以柑橘果皮、叶片和花中为主。几乎所有柑橘果皮中主要积累d-柠檬烯，不同柑橘品种花中最主要的挥发性物质差异较大，如橘花中主要积累γ-萜品烯，甜橙花中主要积累香桧烯。香桧烯主要作为香精油应用于各种香料添加剂中，同时香桧烯具有强烈的消除自由基的功能，使得含有香桧烯的精油具有抗氧化功能，此外香桧烯还具有抗炎、抗微生物和抗真菌的生理活性。目前香桧烯都是自植物中提取，没有关于其人工合成的报道。发明内容本发明为了解决上述技术问题提供了一种新的香桧烯合酶及其编码基因和应用。本发明解决上述技术问题的技术方案如下：一种香桧烯合酶，该蛋白质具有SEQIDNO:1所示的氨基酸序列；或该蛋白质具有在SEQIDNO:1所示的氨基酸序列基础上缺失、置换、插入或添加一个至几个氨基酸的衍生序列且该蛋白质具有香桧烯合酶活性。本发明还提供了一种香桧烯合酶的编码基因，该编码基因编码：a具有SEQIDNO:1所示的氨基酸序列的蛋白质；或b具有衍生自缺失、置换、插入或添加一个至几个氨基酸的SEQIDNO:1所示的氨基酸序列并且具有香桧烯合酶活性的蛋白质。进一步，所述基因为ⅰ或ⅱ的DNA分子：ⅰ具有SEQIDNO:2所示的核苷酸序列的DNA分子；ⅱ与ⅰ所述的核苷酸序列具有90％以上同源性且编码具有香桧烯合酶活性的蛋白质的DNA分子。本发明还提供了一种重组载体，包括上述香桧烯合酶的编码基因。所述重组载体为将上述任一所述编码基因插入出发载体如PET-28a+的多克隆位点得到的重组表达载体。本发明还提供了一种转化体，包括上述重组载体。转化体可以为重组菌，例如，将上述任一所述编码基因插入出发载体如PET-28a+载体的多克隆位点得到的重组表达载体转化至大肠杆菌BL21DE3，得到重组菌。本发明还提供了一种引物对，用于扩增上述香桧烯合酶的编码基因全长及其任意片段。例如，引物对的序列如SEQIDNO:6和SEQIDNO:7所示。本发明还提供了上述香桧烯合酶在香桧烯合成中的应用。本发明还提供了利用上述香桧烯合酶合成香桧烯的方法，包括以下步骤：以牻牛儿基焦磷酸作为底物，在中性条件下，利用所述香桧烯合酶催化香桧烯合成。本发明还提供了一种生产香桧烯合酶的方法，该方法为培养上述转化体并由培养物中收集香桧烯合酶。本发明的有益效果是：本发明提供了一种新的香桧烯合酶及其编码基因，该香桧烯合酶能够催化香桧烯的合成，且催化效率高。附图说明图1为本发明纯化的香桧烯合酶的检测结果，图1A为纯化的香桧烯合酶的SDS-PAGE凝胶电泳图，其中泳道M为Marker，泳道1和4为未纯化的蛋白，泳道2、3、5和6为纯化的蛋白；图1B为纯化的蛋白印记杂交，其中STPS-fl为未切除转运肽的STPS基因编码的蛋白，STPS-tr1和STPS-tr2为纯化的香桧烯合酶；图2为本发明香桧烯催化牻牛儿基焦磷酸GPP合成产物的GC-MS结果图。具体实施方式以下结合附图及具体实施例对本发明的原理和特征进行描述，所举实例只用于解释本发明，并非用于限定本发明的范围。发明人通过红肉脐橙不同发育时期花转录组和代谢组分析发现香桧烯在完全开放花中含量比气球期花中显著降低，通过克隆候选基因，并在大肠杆菌中异源表达，发现一种新的能催化香桧烯合成的香桧烯合酶。实施例1香桧烯合酶编码基因及香桧烯合酶的合成1、香桧烯合酶编码基因合成提取红肉脐橙花的mRNA，以mRNA为模板进行反转录得到cDNA，以cDNA为模板，利用引物对Fw-1和Rv-1进行PCR，克隆出STPS基因的编码区序列，其中Fw、Rv和STPS基因的编码区的核苷酸序列分别为SEQIDNO:3、SEQIDNO:4和SEQIDNO:5所示。SEQIDNO:3的序列为：atgtcttcttgcattaatccctcaSEQIDNO:4的序列为：tcagcctttggtgccaggagaSEQIDNO:5的序列为：atgtcttcttgcattaatccctcaaccttggttacctctgtaaatggtttcaaatgtcttcctcttgcaacaaatggagcagccatcagaatcatggccaaaaataagccagtccaaagccttgtcagcgccaaatatgataatttgacagttgataggagatcagcaaactaccaaccttcaatttgggaccatgattttttgcagtcactgaatagcaactatacggatgaaacatacaaaagacgagcagaagagctgaagggaaaagtgaagacagcgattaaggatgtaaccgagcctctggatcagttggagctgatagataatttgcaaagacttggattggcttatcattttgagcctgagattcggaacatattgcgtaatatccacaaccataataaagattataattggagaaaagaaaatctgtatgcaacctcccttgaattcagactacttagacaacatggctatcctgtttctcaagaggttttcagtggttttaaagacgacaagggaggcttcatttgtgatgatttcaagggaatactgagcttgcatgaagcctcgtattacagcttagaaggagaaagcatcatggaggaggcctggcaattcaccagtaagcatcttaaagaaatgatgatcatcagcaacagcaaggaagaggatgtatttgtagcagaacaagcgaagcgtgcgctggagctccctctgcattggaaagtgcctatgttagaggcaaggtggttcatacacgtttatgagaaaagagaggacaagaaccaccttttacttgagctcgctaagttggagtttaacactttgcaggcaatttaccaggaagaacttaaagacatttcagggtggtggaaggatacaggtcttggagagaaattgagctttgcgaggaacaggttggtagcgtccttcttatggagcatggggatcgcgtttgagcctcaattcgcctactgcaggagagtgctcacaatctcgatagccctaattacagtgattgatgacatttatgatgtctatggaacattggatgaacttgagctattcactgatgctgttgagaggtgggacatcaattatgctttgaagcaccttccgggctatatgaaaatgtgttttcttgcgctttacaactttgttaatgaatttgcttattacgttctcaaacaacaggattttgatatgcttctgagcattaaaaatgcatggcttggcttaatacaagcctacttggtggaggcgaaatggtaccatagcaagtacacaccgaaactggaagaatacttggaaaatggattggtatcaataacgggccctttaattataacgatttcatatctttctggtacaaatccaatcattaagaaggaactggaatttctagaaagtaatccaggtatagttcactggtcatccaagattttccgtctgcaagatgatttgggaacttcatcggacgagatacagagaggggatgttccaaaatcaatccagtgttacatgcatgaaactggtgcctcggaggaagttgctcgtgaacacatcaaggatatgatgagacagatgtggaagaaggtgaatgcatacacagccgataaagactctcccttgactcgaacaactactgagttcctcttgaatcttgtgagaatgtcccattttatgtatctacatggagatgggcatggtgttcaaaaccaagagactatcgatgtcggttttacattgctttttcagcccattcccttggaggacaaagacatggctttcacagcatctcctggcaccaaaggctgaSTPS基因的编码区序列全长1824bp，编码607个氨基酸序列的蛋白。将克隆得到的STPS基因的编码区序列片段回收，连接到克隆载体pTOPO-BluntSimple载体货号：292349AX上，转化到大肠杆菌DH5α中，选择测序正确的菌液提取质粒、得到STPS基因的全长编码区序列。以SignalPhttp:www.cbs.dtu.dkservicesSignalP预测STPS全长基因转运肽，并以切除转运肽引物Fw-2和Rv-2克隆出切除转运肽的序列，即香桧烯合酶的编码基因，该引物对同时会在香桧烯合酶的编码基因序列两端添加双酶切位点，其中Fw-2、Rv-2和香桧烯合酶的编码基因的序列分别为SEQIDNO:6、SEQIDNO:7和SEQIDNO:2，将克隆得到的序列再次连接到pTOPO-BluntSimple载体上进行转化DH5α感受态细胞，并提取测序正确的质粒。将含切除转运肽的STPS基因序列的质粒用内切酶BamHI和xholI进行双酶切并琼脂糖电泳回收酶切产物，与相同内切酶双酶切的PET-28a+并琼脂糖电泳回收酶切产物混合，T4连接酶4℃连接过夜，并转化大肠杆菌BL21感受态细胞。SEQIDNO:6的序列为：cgggatccaggagatcagcaaactaccaacctSEQIDNO:7的序列为：ccgctcgagtcagcctttggtgccaggagatSEQIDNO:2的序列为：aggagatcagcaaactaccaaccttcaatttgggaccatgattttttgcagtcactgaatagcaactatacggatgaaacatacaaaagacgagcagaagagctgaagggaaaagtgaagacagcgattaaggatgtaaccgagcctctggatcagttggagctgatagataatttgcaaagacttggattggcttatcattttgagcctgagattcggaacatattgcgtaatatccacaaccataataaagattataattggagaaaagaaaatctgtatgcaacctcccttgaattcagactacttagacaacatggctatcctgtttctcaagaggttttcagtggttttaaagacgacaagggaggcttcatttgtgatgatttcaagggaatactgagcttgcatgaagcctcgtattacagcttagaaggagaaagcatcatggaggaggcctggcaattcaccagtaagcatcttaaagaaatgatgatcatcagcaacagcaaggaagaggatgtatttgtagcagaacaagcgaagcgtgcgctggagctccctctgcattggaaagtgcctatgttagaggcaaggtggttcatacacgtttatgagaaaagagaggacaagaaccaccttttacttgagctcgctaagttggagtttaacactttgcaggcaatttaccaggaagaacttaaagacatttcagggtggtggaaggatacaggtcttggagagaaattgagctttgcgaggaacaggttggtagcgtccttcttatggagcatggggatcgcgtttgagcctcaattcgcctactgcaggagagtgctcacaatctcgatagccctaattacagtgattgatgacatttatgatgtctatggaacattggatgaacttgagctattcactgatgctgttgagaggtgggacatcaattatgctttgaagcaccttccgggctatatgaaaatgtgttttcttgcgctttacaactttgttaatgaatttgcttattacgttctcaaacaacaggattttgatatgcttctgagcattaaaaatgcatggcttggcttaatacaagcctacttggtggaggcgaaatggtaccatagcaagtacacaccgaaactggaagaatacttggaaaatggattggtatcaataacgggccctttaattataacgatttcatatctttctggtacaaatccaatcattaagaaggaactggaatttctagaaagtaatccaggtatagttcactggtcatccaagattttccgtctgcaagatgatttgggaacttcatcggacgagatacagagaggggatgttccaaaatcaatccagtgttacatgcatgaaactggtgcctcggaggaagttgctcgtgaacacatcaaggatatgatgagacagatgtggaagaaggtgaatgcatacacagccgataaagactctcccttgactcgaacaactactgagttcctcttgaatcttgtgagaatgtcccattttatgtatctacatggagatgggcatggtgttcaaaaccaagagactatcgatgtcggttttacattgctttttcagcccattcccttggaggacaaagacatggctttcacagcatctcctggcaccaaaggctga挑选取阳性大肠杆菌菌液添加到100mL含有50μgmL卡那霉素的LB中在37℃，180rpm生长至A600＝0.6，加入1mMIPTG后转移至16℃，以180rpm培养16h，诱导结束后4℃4000rpm离心5min收集菌体。菌体用4ml1×Ni-NTABindingBuffer50mMNaH2PO4，pH8.0；300mMNaCl；10mM咪唑重悬，菌液用细胞破碎仪破碎，将上清液加入镍柱进行蛋白纯化，得到香桧烯合酶，其为555个氨基酸，香桧烯合酶的氨基酸序列为SEQIDNO:1所示。SEQIDNO:1的序列为：ArgArgSerAlaAsnTyrGlnProSerIleTrpAspHisAspPheLeuGlnSerLeuAsnSerAsnTyrThrAspGluThrTyrLysArgArgAlaGluGluLeuLysGlyLysValLysThrAlaIleLysAspValThrGluProLeuAspGlnLeuGluLeuIleAspAsnLeuGlnArgLeuGlyLeuAlaTyrHisPheGluProGluIleArgAsnIleLeuArgAsnIleHisAsnHisAsnLysAspTyrAsnTrpArgLysGluAsnLeuTyrAlaThrSerLeuGluPheArgLeuLeuArgGlnHisGlyTyrProValSerGlnGluValPheSerGlyPheLysAspAspLysGlyGlyPheIleCysAspAspPheLysGlyIleLeuSerLeuHisGluAlaSerTyrTyrSerLeuGluGlyGluSerIleMetGluGluAlaTrpGlnPheThrSerLysHisLeuLysGluMetMetIleIleSerAsnSerLysGluGluAspValPheValAlaGluGlnAlaLysArgAlaLeuGluLeuProLeuHisTrpLysValProMetLeuGluAlaArgTrpPheIleHisValTyrGluLysArgGluAspLysAsnHisLeuLeuLeuGluLeuAlaLysLeuGluPheAsnThrLeuGlnAlaIleTyrGlnGluGluLeuLysAspIleSerGlyTrpTrpLysAspThrGlyLeuGlyGluLysLeuSerPheAlaArgAsnArgLeuValAlaSerPheLeuTrpSerMetGlyIleAlaPheGluProGlnPheAlaTyrCysArgArgValLeuThrIleSerIleAlaLeuIleThrValIleAspAspIleTyrAspValTyrGlyThrLeuAspGluLeuGluLeuPheThrAspAlaValGluArgTrpAspIleAsnTyrAlaLeuLysHisLeuProGlyTyrMetLysMetCysPheLeuAlaLeuTyrAsnPheValAsnGluPheAlaTyrTyrValLeuLysGlnGlnAspPheAspMetLeuLeuSerIleLysAsnAlaTrpLeuGlyLeuIleGlnAlaTyrLeuValGluAlaLysTrpTyrHisSerLysTyrThrProLysLeuGluGluTyrLeuGluAsnGlyLeuValSerIleThrGlyProLeuIleIleThrIleSerTyrLeuSerGlyThrAsnProIleIleLysLysGluLeuGluPheLeuGluSerAsnProGlyIleValHisTrpSerSerLysIlePheArgLeuGlnAspAspLeuGlyThrSerSerAspGluIleGlnArgGlyAspValProLysSerIleGlnCysTyrMetHisGluThrGlyAlaSerGluGluValAlaArgGluHisIleLysAspMetMetArgGlnMetTrpLysLysValAsnAlaTyrThrAlaAspLysAspSerProLeuThrArgThrThrThrGluPheLeuLeuAsnLeuValArgMetSerHisPheMetTyrLeuHisGlyAspGlyHisGlyValGlnAsnGlnGluThrIleAspValGlyPheThrLeuLeuPheGlnProIleProLeuGluAspLysAspMetAlaPheThrAlaSerProGlyThrLysGly纯化柱为Ni-Agarose纯化系统，填充料Ni-NTAAgarose购自自德国QIAGEN公司，蛋白纯化方法参见说明书。纯化得到的香桧烯合酶进行SDS-PAGE电泳，结果如图1A所示，得到的香桧烯合酶的大小为72kD左右；将纯化得到的香桧烯合酶与未切除转运肽的STPS全长基因的表达产物进行蛋白印记杂交，结果如图2所示。实施例2香桧烯合酶催化香桧烯合成香桧烯合酶可以催化牻牛儿基焦磷酸GPP产生以香桧烯为主的单萜代谢物，通过以下方法验证其催化功能。将纯化的香桧烯合酶50μg加入到500μL缓冲液中缓冲液组分为：25mM4-2-羟乙基-1-哌嗪乙磺酸pH7.3，10mM氯化镁，0.1mM氯化锰，0.2mM钨酸钠，0.1mM氟化钠，5mM二硫苏糖醇和10％甘油，添加50μM以牻牛儿基焦磷酸GPP，覆盖500μL正戊烷正戊烷覆盖在反应液上层，为了萃取反应中生成的物质又能防止生成的萜烯物质挥发，方便GC-MS分析，30℃孵育30min，将正戊烷转移至进样瓶中用于GC-MS分析。对照组不添加香桧烯合酶。GC-MS的条件为：GC-MS结合TR-5质谱柱30m×0.25mm×0.25μm，载气为高纯氦气，进样量为1μL，不分流，恒流模式，流速为1mLmin。进样口、离子源和传输线温度分别为250260和280℃。GC升温程序为：40℃维持3min，以3℃min升温至160℃，维持1min，然后以8℃min升温至240℃并保留3min。MS条件为：离子源EI，电子轰击能量70eV，正离子模式，质量扫描范围mz45-400amu。检测STPS蛋白反应体系中产生的化合物，物质定性基于NIST质谱图库及标准样品，GC-MS检测结果如图2所示，异源表达香桧烯合酶编码基因的大肠杆菌添加GPP后可以产生香桧烯、d-柠檬烯、β-月桂烯、反式-β-罗勒烯、和α-蒎烯，其峰面积分别为74.02％、10.51％、4.73％、5.12％、2.99％和2.64％，测定香桧烯、d-柠檬烯、β-月桂烯、反式-β-罗勒烯、和α-蒎烯各物质的标准曲线，结果如下表所示：注：y:各物质的峰面积，x为浓度μgg根据各物质的标准曲线，得到产生的香桧烯、d-柠檬烯、芳樟醇、反式-β-罗勒烯、β-月桂烯和α-蒎烯的量分别为7.41、1.32、0.99、0.55、0.88、0.30μgg。以上所述仅为本发明的较佳实施例，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。序列表华中农业大学一种香桧烯合酶及其编码基因和应用7SIPOSequenceListing1.01555PRT脐橙CitrussinensisOsbeck1ArgArgSerAlaAsnTyrGlnProSerIleTrpAspHisAspPheLeu151015GlnSerLeuAsnSerAsnTyrThrAspGluThrTyrLysArgArgAla202530GluGluLeuLysGlyLysValLysThrAlaIleLysAspValThrGlu354045ProLeuAspGlnLeuGluLeuIleAspAsnLeuGlnArgLeuGlyLeu505560AlaTyrHisPheGluProGluIleArgAsnIleLeuArgAsnIleHis65707580AsnHisAsnLysAspTyrAsnTrpArgLysGluAsnLeuTyrAlaThr859095SerLeuGluPheArgLeuLeuArgGlnHisGlyTyrProValSerGln100105110GluValPheSerGlyPheLysAspAspLysGlyGlyPheIleCysAsp115120125AspPheLysGlyIleLeuSerLeuHisGluAlaSerTyrTyrSerLeu130135140GluGlyGluSerIleMetGluGluAlaTrpGlnPheThrSerLysHis145150155160LeuLysGluMetMetIleIleSerAsnSerLysGluGluAspValPhe165170175ValAlaGluGlnAlaLysArgAlaLeuGluLeuProLeuHisTrpLys180185190ValProMetLeuGluAlaArgTrpPheIleHisValTyrGluLysArg195200205GluAspLysAsnHisLeuLeuLeuGluLeuAlaLysLeuGluPheAsn210215220ThrLeuGlnAlaIleTyrGlnGluGluLeuLysAspIleSerGlyTrp225230235240TrpLysAspThrGlyLeuGlyGluLysLeuSerPheAlaArgAsnArg245250255LeuValAlaSerPheLeuTrpSerMetGlyIleAlaPheGluProGln260265270PheAlaTyrCysArgArgValLeuThrIleSerIleAlaLeuIleThr275280285ValIleAspAspIleTyrAspValTyrGlyThrLeuAspGluLeuGlu290295300LeuPheThrAspAlaValGluArgTrpAspIleAsnTyrAlaLeuLys305310315320HisLeuProGlyTyrMetLysMetCysPheLeuAlaLeuTyrAsnPhe325330335ValAsnGluPheAlaTyrTyrValLeuLysGlnGlnAspPheAspMet340345350LeuLeuSerIleLysAsnAlaTrpLeuGlyLeuIleGlnAlaTyrLeu355360365ValGluAlaLysTrpTyrHisSerLysTyrThrProLysLeuGluGlu370375380TyrLeuGluAsnGlyLeuValSerIleThrGlyProLeuIleIleThr385390395400IleSerTyrLeuSerGlyThrAsnProIleIleLysLysGluLeuGlu405410415PheLeuGluSerAsnProGlyIleValHisTrpSerSerLysIlePhe420425430ArgLeuGlnAspAspLeuGlyThrSerSerAspGluIleGlnArgGly435440445AspValProLysSerIleGlnCysTyrMetHisGluThrGlyAlaSer450455460GluGluValAlaArgGluHisIleLysAspMetMetArgGlnMetTrp465470475480LysLysValAsnAlaTyrThrAlaAspLysAspSerProLeuThrArg485490495ThrThrThrGluPheLeuLeuAsnLeuValArgMetSerHisPheMet500505510TyrLeuHisGlyAspGlyHisGlyValGlnAsnGlnGluThrIleAsp515520525ValGlyPheThrLeuLeuPheGlnProIleProLeuGluAspLysAsp530535540MetAlaPheThrAlaSerProGlyThrLysGly54555055521668DNA脐橙CitrussinensisOsbeck2aggagatcagcaaactaccaaccttcaatttgggaccatgattttttgcagtcactgaat60agcaactatacggatgaaacatacaaaagacgagcagaagagctgaagggaaaagtgaag120acagcgattaaggatgtaaccgagcctctggatcagttggagctgatagataatttgcaa180agacttggattggcttatcattttgagcctgagattcggaacatattgcgtaatatccac240aaccataataaagattataattggagaaaagaaaatctgtatgcaacctcccttgaattc300agactacttagacaacatggctatcctgtttctcaagaggttttcagtggttttaaagac360gacaagggaggcttcatttgtgatgatttcaagggaatactgagcttgcatgaagcctcg420tattacagcttagaaggagaaagcatcatggaggaggcctggcaattcaccagtaagcat480cttaaagaaatgatgatcatcagcaacagcaaggaagaggatgtatttgtagcagaacaa540gcgaagcgtgcgctggagctccctctgcattggaaagtgcctatgttagaggcaaggtgg600ttcatacacgtttatgagaaaagagaggacaagaaccaccttttacttgagctcgctaag660ttggagtttaacactttgcaggcaatttaccaggaagaacttaaagacatttcagggtgg720tggaaggatacaggtcttggagagaaattgagctttgcgaggaacaggttggtagcgtcc780ttcttatggagcatggggatcgcgtttgagcctcaattcgcctactgcaggagagtgctc840acaatctcgatagccctaattacagtgattgatgacatttatgatgtctatggaacattg900gatgaacttgagctattcactgatgctgttgagaggtgggacatcaattatgctttgaag960caccttccgggctatatgaaaatgtgttttcttgcgctttacaactttgttaatgaattt1020gcttattacgttctcaaacaacaggattttgatatgcttctgagcattaaaaatgcatgg1080cttggcttaatacaagcctacttggtggaggcgaaatggtaccatagcaagtacacaccg1140aaactggaagaatacttggaaaatggattggtatcaataacgggccctttaattataacg1200atttcatatctttctggtacaaatccaatcattaagaaggaactggaatttctagaaagt1260aatccaggtatagttcactggtcatccaagattttccgtctgcaagatgatttgggaact1320tcatcggacgagatacagagaggggatgttccaaaatcaatccagtgttacatgcatgaa1380actggtgcctcggaggaagttgctcgtgaacacatcaaggatatgatgagacagatgtgg1440aagaaggtgaatgcatacacagccgataaagactctcccttgactcgaacaactactgag1500ttcctcttgaatcttgtgagaatgtcccattttatgtatctacatggagatgggcatggt1560gttcaaaaccaagagactatcgatgtcggttttacattgctttttcagcccattcccttg1620gaggacaaagacatggctttcacagcatctcctggcaccaaaggctga1668324DNA人工序列ArtificialSequence3atgtcttcttgcattaatccctca24421DNA人工序列ArtificialSequence4tcagcctttggtgccaggaga2151824DNA脐橙CitrussinensisOsbeck5atgtcttcttgcattaatccctcaaccttggttacctctgtaaatggtttcaaatgtctt60cctcttgcaacaaatggagcagccatcagaatcatggccaaaaataagccagtccaaagc120cttgtcagcgccaaatatgataatttgacagttgataggagatcagcaaactaccaacct180tcaatttgggaccatgattttttgcagtcactgaatagcaactatacggatgaaacatac240aaaagacgagcagaagagctgaagggaaaagtgaagacagcgattaaggatgtaaccgag300cctctggatcagttggagctgatagataatttgcaaagacttggattggcttatcatttt360gagcctgagattcggaacatattgcgtaatatccacaaccataataaagattataattgg420agaaaagaaaatctgtatgcaacctcccttgaattcagactacttagacaacatggctat480cctgtttctcaagaggttttcagtggttttaaagacgacaagggaggcttcatttgtgat540gatttcaagggaatactgagcttgcatgaagcctcgtattacagcttagaaggagaaagc600atcatggaggaggcctggcaattcaccagtaagcatcttaaagaaatgatgatcatcagc660aacagcaaggaagaggatgtatttgtagcagaacaagcgaagcgtgcgctggagctccct720ctgcattggaaagtgcctatgttagaggcaaggtggttcatacacgtttatgagaaaaga780gaggacaagaaccaccttttacttgagctcgctaagttggagtttaacactttgcaggca840atttaccaggaagaacttaaagacatttcagggtggtggaaggatacaggtcttggagag900aaattgagctttgcgaggaacaggttggtagcgtccttcttatggagcatggggatcgcg960tttgagcctcaattcgcctactgcaggagagtgctcacaatctcgatagccctaattaca1020gtgattgatgacatttatgatgtctatggaacattggatgaacttgagctattcactgat1080gctgttgagaggtgggacatcaattatgctttgaagcaccttccgggctatatgaaaatg1140tgttttcttgcgctttacaactttgttaatgaatttgcttattacgttctcaaacaacag1200gattttgatatgcttctgagcattaaaaatgcatggcttggcttaatacaagcctacttg1260gtggaggcgaaatggtaccatagcaagtacacaccgaaactggaagaatacttggaaaat1320ggattggtatcaataacgggccctttaattataacgatttcatatctttctggtacaaat1380ccaatcattaagaaggaactggaatttctagaaagtaatccaggtatagttcactggtca1440tccaagattttccgtctgcaagatgatttgggaacttcatcggacgagatacagagaggg1500gatgttccaaaatcaatccagtgttacatgcatgaaactggtgcctcggaggaagttgct1560cgtgaacacatcaaggatatgatgagacagatgtggaagaaggtgaatgcatacacagcc1620gataaagactctcccttgactcgaacaactactgagttcctcttgaatcttgtgagaatg1680tcccattttatgtatctacatggagatgggcatggtgttcaaaaccaagagactatcgat1740gtcggttttacattgctttttcagcccattcccttggaggacaaagacatggctttcaca1800gcatctcctggcaccaaaggctga1824632DNA人工序列ArtificialSequence6cgggatccaggagatcagcaaactaccaacct32731DNA人工序列ArtificialSequence7ccgctcgagtcagcctttggtgccaggagat31

权利要求：1.一种香桧烯合酶，其特征在于，该蛋白质具有SEQIDNO:1所示的氨基酸序列；或该蛋白质具有在SEQIDNO:1所示的氨基酸序列基础上缺失、置换、插入或添加一个至几个氨基酸的衍生序列且该蛋白质具有香桧烯合酶活性。2.一种香桧烯合酶的编码基因，其特征在于，该基因编码：a具有SEQIDNO:1所示的氨基酸序列的蛋白质；或b具有衍生自缺失、置换、插入或添加一个至几个氨基酸的SEQIDNO:1所示的氨基酸序列并且具有香桧烯合酶活性的蛋白质。3.根据权利要求2所述的一种香桧烯合酶的编码基因，其特征在于，所述基因为ⅰ或ⅱ的DNA分子：ⅰ具有SEQIDNO:2所示的核苷酸序列的DNA分子；ⅱ与SEQIDNO:2所示的核苷酸序列具有90％以上同源性且编码具有香桧烯合酶活性的蛋白质的DNA分子。4.一种重组载体，其特征在于，包括权利要求2～3任一项所述的香桧烯合酶的编码基因。5.一种转化体，其特征在于，包括权利要求4所述的重组载体。6.一种引物对，其特征在于，用于扩增权利要求2～3任一项所述的香桧烯合酶的编码基因全长及其任意片段。7.一种如权利要求1所述的香桧烯合酶在香桧烯合成中的应用。8.一种利用如权利要求1所述的香桧烯合酶合成香桧烯的方法，其特征在于，包括以下步骤：以牻牛儿基焦磷酸作为底物，在中性条件下，利用所述香桧烯合酶催化合成香桧烯。9.一种生产香桧烯合酶的方法，其特征在于，培养权利要求5所述的转化体并由培养物中收集香桧烯合酶。

百度查询： 华中农业大学 一种香桧烯合酶及其编码基因和应用