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申请/专利权人：广东药科大学
摘要：本发明属于生物技术领域，具体涉及一种KDR‑CAR‑NK细胞的的制备方法及其应用。本发明提供的构建KDR‑CAR‑NK细胞的制备方法，主要包括KDR‑CAR序列的构建、构建KDR‑CAR序列载体、构建KDR‑CAR‑NK细胞等过程。采用本发明构建的KDR‑CAR‑NK细胞，可以表达KDR靶向性嵌合抗原受体，提高了NK细胞的靶向性、杀伤性和活力，使NK细胞可以打破肿瘤病灶部位微环境的免疫抑制以及缓解宿主的免疫耐受，实现了对同种异体细胞过继性免疫治疗方面的新突破。
主权项：1.一种KDR-CAR-NK细胞的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：S1、KDR-CAR序列的构建：分别将CD8α、共刺激分子CD28胞内区和CD3ζ胞内信号传导结构域基因序列依次串联拼接进行全基因合成，两端预留限制性内切酶位点XholI和BamHI，利用T4连接酶连接带有相应酶切位点的VEGF165基因，制得KDR-CAR序列；S2、构建KDR-CAR序列载体：将步骤S1制得的KDR-CAR序列克隆到慢病毒载体pcDNA3.1-EGFP上，得重组质粒KDR-CAR序列载体KDR-CARpcDNA3.1-EGFP；S3、构建KDR-CAR-NK细胞：以Opti-MEM作为转染试剂，将步骤S2得到的KDR-CAR序列载体KDR-CARpcDNA3.1-EGFP电穿孔转染至NK细胞，利用荧光检测筛选荧光蛋白阳性的细胞，即得。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 广东药科大学 一种KDR-CAR-NK细胞的制备方法及其应用
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