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申请/专利权人：中国科学院新疆理化技术研究所

摘要：本发明涉及提供一种驱虫斑鸠菊地上部位组织中内生真菌的分离纯化方法及其用途，该方法选用新疆和田地区的驱虫斑鸠菊的花、茎、叶分别用水清洗泥土后，使用蒸馏水冲洗，并依次70%乙醇、5.25%次氯酸钠、70%乙醇浸泡，再用蒸馏水冲洗，将冲洗后的花、茎、叶各部位压碎获得组织液，再分别用蒸馏水，各孵化得到组织液；将组织液加入到由PDA培养基和抗菌剂氯霉素中，在温度28℃下培养，培养后在PDA培养基平板上划线不同颜色、形状和浓度的菌落，利用PDA培养基培养1周，将不同颜色、形状和大小的均匀菌落用于DNA分离，得到9种植物内生真菌。并对获得的9种植物内生真菌进行活性试验。结果表明：获得的内生真菌在金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和白色念珠菌中具有抑制活性；在促进黑色素中具有活性。

主权项：1.一种驱虫斑鸠菊地上部位组织中内生真菌的分离纯化方法，其特征，按下列步骤进行：a、前处理及组织液的获取：选用新疆和田地区的驱虫斑鸠菊的花、茎、叶分别用水清洗泥土后，使用蒸馏水冲洗6次，并依次浓度为70%乙醇浸泡1-2min、浓度为5.25%次氯酸钠浸泡2-5min和浓度为70%乙醇浸泡30-60s，再用蒸馏水冲洗，将冲洗后的花、茎、叶各部位取2g并压碎获得组织液，再分别加入2-3mL蒸馏水，各孵化3min，得到组织液；b、选择氯霉素100μgmL作为抗菌剂；c、选择固体培养基PDA由马铃薯提取物4gL、葡萄糖20gL和琼脂15gL组成，pH为6.0；d、将步骤c中的培养基PDA经温度120℃高压灭菌20min，加入步骤b中的抗菌剂混合，倒入平板培养皿中，再加入步骤a得到的花、茎、叶各部位组织液100µL，在温度28℃下培养7-10天，得到粗纯化真菌；e、培养后在培养基平板上划线不同颜色、形状和浓度的菌落，利用培养基PDA培养1周，对不同颜色、形状和大小的均匀菌落用于DNA分离，得到9种植物内生真菌，分别是AspergillusterreusNR-01、TrichodermaharzianumNR-02、OvatosporasenegalensisNR-03、ChaetomiumglobosumNR-04、ThielaviasubthermophilaNR-06、ThielaviamicrosporeNR-08、AspergilluscalidoustusNR-10、MucorcircinelloidesNR-11和Aspergillussp.NR-12，利用DNA基因序列对内生真菌进行鉴定。

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