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申请/专利权人：尹特荣生物科技株式会社

摘要：本发明涉及一种从自然界分离的长尾噬菌体科Siphoviridae噬菌体Vib‑ANP‑1保藏编号：KCTC13075BP，其具有特异性杀死鳗弧菌Vibrioanguillarum的能力并且包括由SEQ.ID.NO:1表达的基因组，并且涉及一种使用包含作为活性成分的上述噬菌体的组合物来预防和治疗鳗弧菌Vibrioanguillarum感染的方法。

主权项：1.一种长尾噬菌体科噬菌体Vib-ANP-1，其特征在于，所述噬菌体Vib-ANP-1的保藏编号为：KCTC13075BP，其具有特异性杀死鳗弧菌的能力并且包括由SEQ.ID.NO:1表达的基因组。

全文数据：新型鳗弧菌噬菌体VIB-ANP-1及其用于抑制鳗弧菌细菌增殖的用途技术领域本发明涉及一种从自然界分离的噬菌体，其感染鳗弧菌Vibrioanguillarum从而杀死鳗弧菌Vibrioanguillarum，以及一种使用包含作为活性成分的鳗弧菌Vibrioanguillarum的组合物来预防和治疗鳗弧菌Vibrioanguillarum感染的方法。更具体地，本发明涉及一种从自然界分离的长尾噬菌体科Siphoviridae噬菌体Vib-ANP-1登录号：KCTC13075BP，其具有特异性杀死鳗弧菌Vibrioanguillarum的能力且包括由SEQ.ID.NO:1表达的基因组，以及一种使用含有作为活性成分的该噬菌体的组合物来预防鳗弧菌Vibrioanguillarum感染的方法和鳗弧菌Vibrioanguillarum感染后的治疗方法。背景技术鳗弧菌Vibrioanguillarum，属于弧菌属，是一种革兰氏阴性杆菌，已知为代表性的鱼类致病菌，其引起褐牙鲆、鲑鱼、鳗鱼和各种海鱼的伴有出血性败血症的弧菌病。尽管迄今已发现鳗弧菌Vibrioanguillarum的23种血清型，但已知大多数引起鱼弧菌病的鳗弧菌Vibrioanguillarum致病菌是O1和O2抗原类型，均为菌体抗原O抗原。由于在各种鱼类中引起弧菌病，鳗弧菌Vibrioanguillarum对水产养殖业造成严重的经济损失。特别是，由鳗弧菌Vibrioanguillarum感染引起的鱼类中的弧菌病的爆发经常发生，带来巨大的经济损失。因此，迫切需要开发一种适用于预防和进一步治疗鳗弧菌Vibrioanguillarum感染的方法。抗生素广泛用于抑制和治疗由鳗弧菌Vibrioanguillarum引起的感染。近来，由于抗生素抗性细菌的增加，抗生素的有效性不断降低，并且由于针对在养殖鱼类中使用抗生素的管制规定越来越多，因此需要开发除抗生素之外的有效方法。特别是迫切需要对环境友好的方法。最近，使用噬菌体作为对抗细菌性疾病的对策引起了相当多的关注。特别地，由于人们更偏向对环境友好的方法，对噬菌体的关注前所未有之高。噬菌体是感染细菌的非常小的微生物。一旦噬菌体感染细菌，噬菌体就会在细菌细胞内部增殖。增殖后，噬菌体的后代破坏细菌细胞壁，并作为宿主逃离细菌，这表明噬菌体具有杀死细菌的能力。噬菌体感染细菌的方式具有特异性极高的特征，因此感染特定细菌的噬菌体类型的数量是有限的。也就是说，某种噬菌体只能感染一种特定的细菌，这表明某种噬菌体只能杀死一种特定的细菌而不会伤害其他细菌。基于噬菌体的这种细菌特异性，噬菌体仅对靶细菌赋予抗菌作用，并且不影响环境中或鱼的肠中的共生菌。已广泛用于细菌治疗的常规抗生素同时影响多种细菌。这会引起诸如环境污染或动物正常菌群紊乱的问题。另一方面，噬菌体的使用不会干扰动物的正常菌群，因为靶细菌被选择性杀死。故而可以安全地利用噬菌体，由此，与任何其他抗生素相比，这大大降低了使用中不利作用的可能性。噬菌体最初是由英国细菌学家Twort在1915年发现的，当时他发现微球菌菌落融化并且由于某种未知东西而变得透明。1917年，法国细菌学家d’Herelle发现痢疾患者粪便滤液中的痢疾志贺氏菌Shigelladysenteriae被某种东西融化，并进一步研究了这种现象。结果，他独立地鉴定出了噬菌体，并将它们命名为噬菌体，这意味着“吃掉细菌”。从那以后，不断发现了对志贺氏菌Shigella、伤寒沙门氏菌SalmonellaTyphi和霍乱弧菌Vibriocholerae等病原菌起作用的噬菌体。由于噬菌体具有杀死细菌的独特能力，人们自发现噬菌体以来就期待其成为对抗细菌感染的有效对策，并且对其已有大量相关研究。然而，在Fleming发现青霉素后，由于抗生素的广泛传播，只有一些东欧国家和前苏联的噬菌体研究仍在继续。自2000年以来，传统抗生素的局限性随着抗生素抗性细菌的增加而显现，开发噬菌体作为传统抗生素的替代物的可能性凸显出来，因此噬菌体作为抗菌剂再次引起关注。特别是近期各国政府对抗生素使用的管制越发严格，使得人们对噬菌体的兴趣持续上升，其工业应用也越来越多地出现。如上所述，噬菌体往往对细菌具有高度特异性。由于这种特异性，噬菌体经常仅对细菌的某些菌株表现出抗菌作用，即使细菌属于同一种类。此外，不同的噬菌体对相同的细菌菌株表现出不同的抗菌强度。因此，有必要收集多种用于有效控制特定细菌的噬菌体。于是，为了开发响应于鳗弧菌Vibrioanguillarum的有效噬菌体利用方法，必须获得对鳗弧菌Vibrioanguillarum具有抗菌作用的多种噬菌体。此外，需要从所得噬菌体中筛选出在抗菌强度和抗菌谱方面优于其他噬菌体的噬菌体。具体实施方式技术问题因此，本发明的各发明人致力于开发一种组合物，该组合物可用于使用从自然界分离并且可以选择性地杀死鳗弧菌Vibrioanguillarum的噬菌体来预防或治疗鳗弧菌Vibrioanguillarum感染，并且进一步建立使用该组合物来预防或治疗鳗弧菌Vibrioanguillarum感染的方法。结果，发明人从自然界中分离出适合于该目的的噬菌体，并取得了将分离的噬菌体与其他噬菌体区分开的基因组的基因序列。然后，发明人开发了包含作为活性成分的噬菌体的组合物，并认定该组合物可以有效地用于预防和治疗鳗弧菌Vibrioanguillarum感染，从而完成了本发明。因此，本发明的一个目的是提供一种从自然界分离的长尾噬菌体科Siphoviridae噬菌体Vib-ANP-1登录号：KCTC13075BP，其具有特异性杀死鳗弧菌Vibrioanguillarum的能力，并且包括由SEQ.ID.NO:1表达的基因组。本发明的另一个目的是提供一种适用于预防鳗弧菌Vibrioanguillarum感染的组合物，其包括感染鳗弧菌Vibrioanguillarum的噬菌体Vib-ANP-1，从而杀死作为活性成分的鳗弧菌Vibrioanguillarum，以及使用所述组合物预防鳗弧菌Vibrioanguillarum感染的方法。本发明的另一个目的是提供一种适用于治疗鳗弧菌Vibrioanguillarum感染的组合物，其包括感染鳗弧菌Vibrioanguillarum从而杀死作为活性成分的鳗弧菌Vibrioanguillarum的噬菌体Vib-ANP-1，以及使用所述组合物治疗鳗弧菌Vibrioanguillarum感染的方法。本发明的另一个目的是提供一种使用所述组合物来预防和治疗鳗弧菌Vibrioanguillarum感染的药浴剂浸渍剂。本发明的另一个目的是提供一种饲料添加剂，其通过使用所述组合物预防和治疗鳗弧菌Vibrioanguillarum感染而在养殖时有效。技术方案本发明提供了一种从自然界分离的长尾噬菌体科Siphoviridae噬菌体Vib-ANP-1登录号：KCTC13075BP，其具有特异性杀死鳗弧菌Vibrioanguillarum的能力并且包括由SEQ.ID.NO:1表达的基因组，以及一种使用包含作为活性成分的该噬菌体的组合物来预防和治疗鳗弧菌Vibrioanguillarum感染的方法。本发明的发明人分离了噬菌体Vib-ANP-1，然后于2016年8月16日保藏于韩国生物科学与生物技术研究所韩国典型培养物保藏中心登录号：KCTC13075BP。本发明还提供适用于预防或治疗鳗弧菌Vibrioanguillarum感染的药浴剂和饲料添加剂，其包括作为活性成分的噬菌体Vib-ANP-1。由于本发明的组合物中包含的噬菌体Vib-ANP-1有效地杀死了鳗弧菌Vibrioanguillarum，因此被认为对由鳗弧菌Vibrioanguillarum引起的疾病的预防感染的预防或治疗感染的治疗有效。因此，本发明的组合物可用于预防和治疗由鳗弧菌Vibrioanguillarum引起的疾病。在本说明书中，术语“预防”表示i阻断鳗弧菌Vibrioanguillarum感染；ii抑制由鳗弧菌Vibrioanguillarum感染引起的疾病的发展。在本说明书中，术语“治疗”表示i抑制由鳗弧菌Vibrioanguillarum引起的疾病；ii减轻由鳗弧菌Vibrioanguillarum引起的疾病的病理状况的所有行为。在本说明书中，术语“分离”表示通过应用多种实验技术从自然界分离噬菌体并且获得可以将目标噬菌体与其他噬菌体区分开的特征的行为，并且还包括使用生物工程技术增殖目标噬菌体使得目标噬菌体在工业上适用的行为，。包含在本发明组合物中的药学上可接受的载体是通常用于制备药物制剂的载体，其示例包括乳糖、葡萄糖、蔗糖、山梨糖醇、甘露醇、淀粉、阿拉伯胶、磷酸钙、海藻酸盐、明胶、硅酸钙、微晶纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、纤维素、水、糖浆、甲基纤维素、羟基苯甲酸甲酯、羟基苯甲酸丙酯、滑石、硬脂酸镁和矿物油，但不限于此。除了上述成分之外，本发明的组合物可另外包括润滑剂、润湿剂、甜味剂、调味剂、乳化剂、悬浮剂和防腐剂。在本发明的组合物中，包含噬菌体Vib-ANP-1作为活性成分。所包含噬菌体Vib-ANP-1的浓度为1×101pfuml至1×1030pfuml或1×101pfug至1×1030pfug的，优选为1×104pfuml至1×1015pfuml或1×104pfug至1×1015pfug。本发明的组合物可以根据本发明所属领域的普通技术人员可轻松实施的方法、使用药学上可接受的载体和或赋形剂、以单位剂量或多剂量容器的形式来配制。制剂的形式可以是油或水溶性介质的溶液、悬浮液或乳液、浓缩物、粉末、颗粒、片剂或胶囊。可以另外包括分散剂或稳定剂。根据使用目的，本发明的组合物可以制备成药浴剂和饲料添加剂，但不限于此。为此目的，赋予针对其他细菌物种的抗菌活性的噬菌体可以进一步包括在本发明的组合物中以改善其有效性。此外，在本发明的组合物中还可以含有具有针对鳗弧菌Vibrioanguillarum的抗菌活性的其他种类的噬菌体。这些噬菌体可以适当组合以最大化抗菌效果，因为它们针对鳗弧菌Vibrioanguillarum的抗菌活性可能在抗菌强度和抗菌谱方面不同。有益效果与基于包括传统抗生素的化学物质的传统方法相比，根据本发明的使用包含作为活性成分的噬菌体Vib-ANP-1的组合物来预防和治疗鳗弧菌Vibrioanguillarum感染的方法可具有针对鳗弧菌Vibrioanguillarum的极高特异性的优点。这意味着该组合物可用于预防或治疗鳗弧菌Vibrioanguillarum感染而不影响其他有用的共生菌，并且根据其用途具有较少的副作用。通常，当使用诸如抗生素的化学物质时，共生菌也会受到损害，从而削弱动物的免疫力并由于其使用而产生各种副作用。此外，本发明的组合物使用从自然界分离的噬菌体作为活性成分，因此它非常环保。同时，在噬菌体针对相同种类的细菌表现出抗菌活性的情况下，噬菌体的抗菌活性在抗菌强度和抗菌谱方面是不同的[对于属于鳗弧菌Vibrioanguillarum的各种细菌的菌株而言，即应用于个体细菌菌株的噬菌体的抗菌活性谱]。一般来说，噬菌体通常仅对某些细菌菌株有效，即使在同一种类中也是如此。也就是说，即使对于相同种类的细菌，噬菌体的抗菌活性也可能取决于细菌菌株。因此，本发明可以提供针对鳗弧菌Vibrioanguillarum的抗菌活性，该抗菌活性不同于作用于鳗弧菌Vibrioanguillarum的其他噬菌体提供的抗菌活性。这提供了显著不同的工业领域适用性。附图说明图1是显示噬菌体Vib-ANP-1形态的电子显微照片。图2是显示噬菌体Vib-ANP-1杀死鳗弧菌Vibrioanguillarum的能力的实验结果的照片。基于平板培养基的中心线，仅在其左侧点上不含噬菌体Vib-ANP-1的缓冲液，并在其右侧点上含有噬菌体Vib-ANP-1的溶液。在右侧观察到的透明区是由于噬菌体Vib-ANP-1的作用而通过裂解靶细菌而形成的噬菌斑。实施本发明的最佳方式在下文，将参照实施例更详细地描述本发明。然而，这些实施例仅是本发明的示例，并且本发明的范围不限于这些实施例。实施例1：能够杀死鳗弧菌Vibrioanguillarum的噬菌体的分离从自然界收集样品以分离能够杀死鳗弧菌Vibrioanguillarum的噬菌体。同时，用于噬菌体分离的鳗弧菌Vibrioanguillarum菌株此前已由本发明的发明人分离并鉴定为鳗弧菌Vibrioanguillarum。下文详细描述噬菌体的分离程序。将收集的样品加入到以11,000的比例接种鳗弧菌Vibrioanguillarum的LBLuria-Bertani培养基胰蛋白胨，10gL；酵母提取物，5gL；氯化钠，10gL中，然后在30℃下振荡培养3至4小时。完成培养后，以8,000rpm进行离心分离20分钟，并回收上清液。将回收的上清液以11,000的比例接种鳗弧菌Vibrioanguillarum，然后在30℃下振荡培养3至4小时。当样品含有噬菌体时，重复上述程序共5次，以充分增加噬菌体的数量滴度。重复该程序5次后，将培养液以8,000rpm进行离心分离20分钟。离心分离后，使用0.45μm过滤器过滤回收的上清液。将获得的滤液用于典型的斑点测定，以检查其中是否包含能够杀死鳗弧菌Vibrioanguillarum的噬菌体。斑点测定如下进行：将LB培养基以11,000的比例接种鳗弧菌Vibrioanguillarum，然后在30℃下振荡培养过夜。将上述制备的鳗弧菌Vibrioanguillarum培养液3mlOD600为1.5涂抹在LALuria-Bertani琼脂：胰蛋白胨，10gL；酵母提取物，5gL；氯化钠，10gL；琼脂，15gL板上。将板放在干净的工作台上约30分钟以干燥涂抹溶液。干燥后，将制备的滤液10μl点在涂抹鳗弧菌Vibrioanguillarum的板上，然后放置约30分钟以干燥。干燥后，将经过点样的板在30℃下静置培养一天，然后检查滴加滤液位置的透明区的形成。在滤液产生透明区的情况下，判断其中包含能够杀死鳗弧菌Vibrioanguillarum的噬菌体。通过上述检查，可以得到含有具有杀死鳗弧菌Vibrioanguillarum的能力的噬菌体的滤液。从上面确认的滤液中分离纯噬菌体，制得能够杀死鳗弧菌Vibrioanguillarum的噬菌体。使用常规噬菌斑测定法分离纯噬菌体。详细地，使用灭菌的尖端回收在噬菌斑测定过程中形成的噬菌斑，然后将其加入到鳗弧菌Vibrioanguillarum的培养溶液中，然后在30℃下培养4至5小时。培养后，以8,000rpm进行离心分离20分钟，得到上清液。将鳗弧菌Vibrioanguillarum培养液以150的体积比添加到所得上清液中，然后在30℃下培养4至5小时。为了增加噬菌体的数量，重复上述过程至少5次。然后，以8,000rpm进行离心分离20分钟以获得最终上清液。使用所得上清液进一步进行噬菌斑测定。通常，纯噬菌体的分离不是通过程序的一次迭代完成的，因此使用上面形成的所得噬菌斑重复上述程序。在重复该程序至少5次后，获得含有纯噬菌体的溶液。通常，重复分离纯噬菌体的程序直到产生的噬菌斑在大小和形态上彼此相似。此外，使用电子显微镜确认了纯噬菌体的最终分离。在使用电子显微镜确认纯噬菌体的分离之前，重复上述程序。根据常规方法进行电子显微镜检查。简言之，将含有纯噬菌体的溶液上样到铜网上，然后用2％的乙酸铀酰负染色并干燥。然后使用透射电子显微镜观察其形态。分离的纯噬菌体的电子显微照片如图1所示。基于形态学特征，证实上述新型噬菌体属于长尾噬菌体科Siphoviridae噬菌体。将上述确认的含有纯噬菌体的溶液进行以下纯化处理。将鳗弧菌Vibrioanguillarum培养液以基于噬菌体溶液的总体积为150的体积比加入到含有纯噬菌体的溶液中，然后进一步培养4至5小时。培养后，以8,000rpm进行离心分离20分钟，得到上清液。重复该程序总共5次，得到含有足够数量噬菌体的溶液。使用0.45μm过滤器过滤从最终离心分离获得的上清液，然后进行常规聚乙二醇PEG沉淀过程。具体地，将PEG和NaCl加入到100ml的滤液中直至达到10％的PEG80000.5M的NaCl，然后在4℃下放置2至3小时。此后，以8,000rpm进行离心分离30分钟以获得噬菌体沉淀物。将得到的噬菌体沉淀物悬浮于5ml缓冲液10mMTris-HCl，10mMMgSO4，0.1％明胶，pH8.0中。所得材料称为噬菌体悬浮液或噬菌体溶液。结果，收集上面纯化的纯噬菌体，命名为噬菌体Vib-ANP-1，然后于2016年8月16日保藏于韩国生物科学与生物技术研究所韩国典型培养物保藏中心登录号：KCTC13075BP。实施例2：噬菌体Vib-ANP-1基因组的分离和序列分析分离噬菌体Vib-ANP-1的基因组如下。使用与实施例1中相同的方法将基因组与获得的噬菌体悬浮液分离。首先，为了消除悬浮液中包含的鳗弧菌Vibrioanguillarum的DNA和RNA，将DNaseI和RNaseA各自200U加入到10ml的噬菌体悬浮液中，然后在37℃下放置30分钟。放置30分钟后，为了使DNaseI和RNaseA活性失活，向其中加入500μl的0.5M的乙二胺四乙酸EDTA，然后放置10分钟。此外，将所得混合物在65℃下再放置10分钟，然后向其中加入100μl的蛋白酶K20mgml以破坏噬菌体的外壁，然后在37℃下反应20分钟。之后，向其中加入10％的十二烷基硫酸钠SDS500μl，然后在65℃下反应1小时。反应1小时后，向反应溶液中加入10ml的以25:24:1的组分比混合的苯酚：氯仿：异戊醇溶液，然后充分混合。此外，将所得混合物以13,000rpm进行离心分离15分钟以分离各层。在分离的层中，选择上层，并以1.5的体积比向其中加入异丙醇，然后以13,000rpm离心分离10分钟以沉淀基因组。收集沉淀物后，向沉淀物中加入70％乙醇，然后以13,000rpm离心分离10分钟以洗涤沉淀物。回收洗涤的沉淀物，真空干燥，然后溶解在100μl的水中。重复该程序以获得足够量的噬菌体Vib-ANP-1的基因组。使用来自Macrogen,Inc.的IlluminaMi-Seq设备进行下一代测序分析，得到上述获得的噬菌体Vib-ANP-1基因组的序列信息。最终分析的噬菌体Vib-ANP-1基因组大小为213,970bp，且全基因组的序列由SEQ.ID.NO:1表示。在网上使用BLAST研究上面获得的噬菌体Vib-ANP-1基因组序列与先前报道的噬菌体基因组序列的同源性相似性。BLAST研究的结果是，未确认具有50％或更高同源性的噬菌体序列。基于该结果，可以得出结论，噬菌体Vib-ANP-1肯定是先前未报道的新型噬菌体。此外，由于噬菌体的抗菌强度和抗菌谱通常取决于噬菌体的类型，因此认为噬菌体Vib-ANP-1可提供不同于先前报道的任何其他噬菌体的抗菌活性。实施例3：噬菌体Vib-ANP-1杀死鳗弧菌Vibrioanguillarum的能力的研究研究了分离的噬菌体Vib-ANP-1杀死鳗弧菌Vibrioanguillarum的能力。为了研究该杀灭能力，以与实施例1中所述相同的方式使用斑点测定法观察透明区的形成。将本发明的发明人分离并鉴定为鳗弧菌Vibrioanguillarum的总共17个菌株用作用于研究该杀灭能力的鳗弧菌Vibrioanguillarum。噬菌体Vib-ANP-1能够杀死作为实验靶标的17株鳗弧菌Vibrioanguillarum中的总共16个菌株。代表性的实验结果如图2所示。同时，还在单独的实验中研究了噬菌体Vib-ANP-1杀死迟钝爱德华氏菌Edwardsiellatarda、副溶血弧菌Vibrioparahaemolyticus，格氏乳球菌Lactococcusgarvieae、副乳房链球菌Streptococcusparauberis、海豚链球菌Streptococcusiniae和杀鲑气单胞菌Aeromonassalmonicida的能力。结果，噬菌体Vib-ANP-1不具有杀死这些微生物的能力。因此，证实噬菌体Vib-ANP-1具有杀死鳗弧菌Vibrioanguillarum的特异性能力和对抗鳗弧菌Vibrioanguillarum的广谱抗菌谱，表明噬菌体Vib-ANP-1可用作用于预防和治疗鳗弧菌Vibrioanguillarum感染的组合物的活性成分。实施例4：关于使用噬菌体Vib-ANP-1预防鳗弧菌Vibrioanguillarum感染的实验实施例将100μl的噬菌体Vib-ANP-1溶液以1×108pfuml的水平加入到含有9ml的LB培养基的试管中。仅向另一个含有9ml的LB培养基的试管中另外加入相同量的LB培养基。然后将鳗弧菌Vibrioanguillarum培养液加入每个试管中，使吸光度在600nm处达到约0.5。加入鳗弧菌Vibrioanguillarum后，将试管转移到30℃下的培养箱中，然后振荡培养，在此期间观察到鳗弧菌Vibrioanguillarum的生长。如表1所示，观察到鳗弧菌Vibrioanguillarum的生长在添加了噬菌体Vib-ANP-1溶液的试管中得到抑制，而在没有添加噬菌体溶液的试管中未抑制鳗弧菌Vibrioanguillarum的生长。[表1]鳗弧菌Vibrioanguillarum的生长抑制上述结果表明，本发明的噬菌体Vib-ANP-1不仅抑制了鳗弧菌Vibrioanguillarum的生长，而且还具有杀死鳗弧菌Vibrioanguillarum的能力。因此，可以得出结论，噬菌体Vib-ANP-1可用作用于预防鳗弧菌Vibrioanguillarum感染的组合物的活性成分。实施例5：使用噬菌体Vib-ANP-1预防鳗弧菌Vibrioanguillarum感染的动物实验研究了噬菌体Vib-ANP-1对受到鳗弧菌Vibrioanguillarum感染的褐牙鲆的预防作用。准备共2组幼体褐牙鲆体重：5g至7g；体长：8cm至10cm，每组50只，分开养殖在水箱中，并进行实验14天。控制水箱周围的环境，并且水箱所在的实验室中的温度保持恒定。在从实验第1天开始的整个实验期间，根据传统的喂食方法，向实验组给予噬菌体的组中的褐牙鲆喂食含有1×108pfug的噬菌体Vib-ANP-1的饲料。相反，根据与实验组相同的方法向对照组未给予噬菌体的组的褐牙鲆喂食与实验组饲料的不同之处仅在于不含有噬菌体Vib-ANP-1的饲料。从实验开始后的第7天开始，将提供的饲料以1×108cfug的水平用鳗弧菌Vibrioanguillarum污染2天，然后分别每天提供两次，以诱导鳗弧菌Vibrioanguillarum感染。从实验开始后第9天诱导鳗弧菌Vibrioanguillarum感染后第2天开始，每天在所有试验动物中检查弧菌病发病机理。通过测量体变暗指数来检查弧菌病发病机理。使用用于测量深色DC评分的常规方法0：正常；1：轻微变暗；2：强烈变暗进行体变暗指数的测量。结果示于表2中。[表2]体变暗指数测量结果平均从以上结果可以确认，本发明的噬菌体Vib-ANP-1可以非常有效地抑制鳗弧菌Vibrioanguillarum感染。实施例6：使用噬菌体Vib-ANP-1治疗鳗弧菌Vibrioanguillarum的感染性疾病的实施例研究了噬菌体Vib-ANP-1对患有由鳗弧菌Vibrioanguillarum引起的弧菌病的褐牙鲆的治疗效果。准备共2组幼体褐牙鲆体重：5g至7g；体长：8cm至10cm，每组60只，分别在水箱中养殖，并进行实验14天。控制水箱周围的环境，并且水箱所在的实验室中的温度保持恒定。从实验开始后第5天开始，按照常规喂养方法，每天两次提供以1×108cfug的水平被鳗弧菌Vibrioanguillarum污染的饲料，持续3天。从提供被鳗弧菌Vibrioanguillarum污染的饲料的程序的最后一天开始，在两个水槽中观察到显示出弧菌病临床症状的褐牙鲆受试者。从在提供被鳗弧菌Vibrioanguillarum污染的饲料三天后的第二天实验开始后第8天开始，根据传统的喂食方法，向实验组给予噬菌体的组中的褐牙鲆喂食含有噬菌体Vib-ANP-11×108pfug的饲料。相反，根据与实验组相同的方法向对照组未给予噬菌体的组的褐牙鲆喂食与实验组饲料的不同之处仅在于不含有噬菌体Vib-ANP-1的饲料。从强制感染鳗弧菌Vibrioanguillarum后第3天实验开始后第8天开始，每天在所有试验动物中检查弧菌病发病机理。如实施例5中那样通过测量体变暗指数来检查由鳗弧菌Vibrioanguillarum引起的弧菌病发病机理。结果示于表3中。[表3]体变暗指数测量结果平均从以上结果可以确认，本发明的噬菌体Vib-ANP-1可以非常有效地治疗由鳗弧菌Vibrioanguillarum引起的感染性疾病。实施例7：饲料添加剂和饲料的制备使用噬菌体Vib-ANP-1溶液制备饲料添加剂，使得每1g饲料添加剂中噬菌体Vib-ANP-1的含量为为1×108pfu。制备饲料添加剂的方法如下：将麦芽糖糊精50％，wv加入噬菌体溶液中，然后将得到的混合物冷冻干燥。最后，将干燥的混合物研磨成细粉。在上述制备程序中，干燥步骤可以用在减压下干燥、加热干燥或在室温下干燥来代替。为了制备用于比较的对照，制备不含噬菌体但含有用于制备噬菌体溶液的缓冲液10mMTris-HCl，10mMMgSO4，0.1％明胶，pH8.0的饲料添加剂。将上述制备的两种饲料添加剂各自与生鱼基湿颗粒以250的重量比混合，从而制备两种最终饲料。实施例8：药浴剂的制备制备药浴剂的方法如下：使用噬菌体Vib-ANP-1溶液制备药浴剂，使得每1ml药浴剂中噬菌体Vib-ANP-1的含量为1×108pfu。在制备药浴剂的方法中，加入噬菌体Vib-ANP-1溶液，使每1ml用于制备噬菌体溶液的缓冲液中噬菌体Vib-ANP-1的含量为为1×108pfu，并充分进行混合。为了制备用于比较的对照，用于制备噬菌体溶液的缓冲液用作不含噬菌体的药浴剂。将两种制备的药浴剂以体积比为1,000用水稀释，得到最终的药浴剂。实施例9：对褐牙鲆养殖的饲喂效果的确认使用实施例7和8中制备的饲料和药浴剂研究褐牙鲆养殖的饲喂结果的改善。特别地，研究集中在死亡率。将总共1,000只幼体褐牙鲆分为两组，每组包括500只褐牙鲆A组：饲料饲喂；B组：用药浴剂处理，并进行为期4周的实验。每组分为几个小组，每小组包括250只褐牙鲆，且小组分为施用噬菌体Vib-ANP-1的小组小组-①和没有施用噬菌体的小组小组-②。在本实验中，目标褐牙鲆是幼体体重：5g至7g；体长：8cm至10cm，且不同实验小组的幼体褐牙鲆养殖在不同的水箱中，这些水箱以一定的空间间隔彼此分开放置。小组的分类和命名如表4所示。[表4]褐牙鲆饲养实验中的小组分类和表达在提供饲料的情况下，按照表4中的分类根据传统饲养方法提供实施例7中制备的饲料。按照表4中的分类根据传统处理方法使用如实施例8所述制备的药浴剂进行使用药浴剂的处理。结果示于表5中。[表5]在喂养实验中的褐牙鲆死亡率分组死褐牙鲆实验的全部褐牙鲆数量死亡率％A-①82503.2A-②4325017.2B-①102504.0B-②5525022.0上述结果表明，根据本发明制备的饲料的提供和使用根据本发明制备的药浴剂的处理可有效地改善褐牙鲆养殖中的饲喂结果。因此，可以得出结论，本发明的组合物可以有效地应用于改善动物饲养的结果。虽然已经参考本发明的示例性实施方案具体示出和描述了本发明，但是本领域技术人员应理解，这些具体描述仅是优选实施方案，并且本发明的范围不限于此。因此，本发明的范围旨在由所附权利要求及其等同物限定。保藏单位名称：韩国生物科学与生物技术研究所登录号：KCTC13075BP登录日期：20160816国际承认用于专利程序的微生物保存布达佩斯条约国际表原始保藏收据依据细则7.1发布保藏人姓名：尹特荣生物科技株式会社地址：JoongangInduspiaV903,137，Sagimakgol-ro，137，Joimawon-gu，Seongnam，Kyeonggi-do，大韩民国13202序列表尹特荣生物科技株式会社型鳗弧菌噬菌体VIB-ANP-1及其用于抑制鳗弧菌细菌增殖的用途KP0904761SIPOSequenceListing1.01213970DNABacteriophageVib-ANP-11atctgaatattcatgtctgtgattcttgcaatggcagaacgtatactaactatagcctcg60tctgcctcttgtgctttgttaaccgcttcgattgcagtgttcttactatcattcatcacc120acggaaacagaatgtgcgcctgattgtaactgttcgatcatctgcttgatttcagtagtt180gactcttgtgttcgtttagcaagagttcgcacctcatcagcaacaacagcaaaaccacgt240ccctgttcacctgctctagctgcctcaatggcggcattaagtgccagtaggttggtctgg300tcagctatctcatttatcacctgaagaactttttcaatattgtcagaagctatagcaaga360gattgaacttcttgcacggcctcatcaattcgactagccaacacactaatggtttgggtt420gtatgattaaccaccacattaccatgattagctgcatcatcagcctcttgagcagccgca480gctgcattttgtgcattggttgcaacctcagatgacgctgtggccatttcattcatagcc540gtggccaactgctccaattcttctaattgctttgtcatagccattgcggagtttctagca600ccagcatcggattgacttgcacctatttctatctgtccactaatgtcttttagatggata660attaactcttggagtctctgtgtaaaggtgttaaagttgttagcaaggtgtgagaattcc720aaatcggtgttagtgtctaacctttgagttaaatcaccttcgcccgaagcaacattctca780attgccttgtttagtaaaccaagtggtttcatcaagaacccagttaggaacatcataata840gggaaacttacgatgatagcaacaatcgaataaaccaaagacagattccgcatattagta900acgtcagaaaatgctttttcttgatttattgccgaaccaacaaaccacccattctctttt960gtcttagacaaaccaataacgtactcttcaccgccgatgcttagattctgtaatccctct1020ctgatttttaaacccggtatggtttcagttattacgctaccgtttagctttttattaggg1080tgtgcaataacaacaccgtcactggatactataaagaggaaaccaattttatctaacgag1140gtgcctgtgaccagacccgctaattcctcaaggctaacatcgtaaaacatagcaccttgg1200aagcggctgccttcgcgtataggggttgccacagatacaataacttcccctgttgcagaa1260tcgacataaggagcagtagtcactgttttatttttgctcttggcgtctatgtaccacggc1320cttgctctcgcatcccaatctttacctgggtgccagctaggctcattagaaataggatta1380ccgtctttttcaaaaccaccgccaacaataagaaacatttctttcaacgttggcttgtta1440atcacttcggtgatgttctctaatgacggattgctgttgattaaatcacttgagtattta1500accaaagctatttttttatcgatgttatcatcgacagatgttcttacggcattgactgtc1560tcaccaacgtatgtgtcgacattagttttaacaatcccttcaacagttttatactgttgg1620aatgacaataacccgacggttatcatcagaagcgcagacgcccctgccgttactttatga1680ctgaatttcatttttaatcctcttctgaattaagattacaaaaaaagagggggatgtctc1740cccctcaatttaattacgttgttagacgcgtttgttgtattaggctgtaagccatcacaa1800tatcctcgaagggatacttactaagttcaccaactaaacgattgacgttttccgtaacct1860caaacagctctcggtcatcttcaataccatacagcgatttaattcttcggagtgttttct1920ttcccgggaatcgttttccattctctatggtggagtaataagctggctctatgtctaggg1980ctttagcggtatcgcttgtgcttctattactcaataaccgtaaggtttttattttagttg2040caaatattactccactttccacattttgtccttcagggccatgacgtactcgttgtagtg2100aggttgcagtgccccataaagagaacgtaatgtgtctggatcggaaattccgcagttaag2160cacattactaaacaacggagtgtctttattgtacaaatctcttgaacgctccatgagtag2220agcgatgtgatgaggatgtcctttaccacgaccacctgttcccaaatcgaagaattgaac2280cgagttgttcaaggcaccggagatcactttattgacgtcagggtaaagtccttctagcat2340caaacgatgtaagttacgaccaaagattgaaagaatggtgtttgtttccaggtactctga2400gtagtacggtactgaacgctccagagttagaaatacttcacgcccaaggaaactattact2460tggtgaacttgaccatgtgttgctcagcttactaccacgtgacaactcaacatcatactc2520gtgttggttaggaatctgatttaacatcatgccatgttcaggatagtacgctgtgtcgaa2580aaccggaaggtggtgcactttgttgcctgtatacaaaaccacaggtttgtagttactatt2640ctcaatgaaaccaaacaagtaattgtcctgtccgttgcgttggtactccatgacgaacaa2700atccaacttcgcttcggttgtctcgcctttgatacccaccaagtcacgtagctcaacctg2760atcaatagacaactcgccacttgccaatcgctccaaggtgcgttgattcaattcttgtgt2820gaattgggtattgatgaatactaggttgtcgcgtttcacgtagatgttgaaattttccat2880ttttgttctctcttttccgatcgttatttttaacggtgcaagtatatattttgacactct2940agatactagaggggtaggggtta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权利要求：1.一种从自然界分离的长尾噬菌体科Siphoviridae噬菌体Vib-ANP-1登录号：KCTC13075BP，其具有特异性杀死鳗弧菌Vibrioanguillarum的能力并且包括由SEQ.ID.NO:1表达的基因组。2.一种用于预防和治疗鳗弧菌Vibrioanguillarum感染的组合物，其包括：作为活性成分的如权利要求1所述的噬菌体Vib-ANP-1登录号：KCTC13075BP。3.如权利要求2所述的用于预防和治疗鳗弧菌Vibrioanguillarum感染的组合物，其中所述组合物用于制备药浴剂或饲料添加剂。4.用于预防或治疗鳗弧菌Vibrioanguillarum感染的方法，所述方法包括：向除人类以外的动物施用作为活性成分的如权利要求2或权利要求3所述的包括噬菌体Vib-ANP-1登录号：KCTC13075BP的组合物。5.如权利要求4所述的用于预防或治疗鳗弧菌Vibrioanguillarum感染的方法，其中，给所述除人类以外的动物施用所述组合物作药浴剂或饲料添加剂之用。

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