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摘要:本发明涉及一种从细弱红翎菜综合提取藻胆蛋白及卡拉胶的方法,经以下步骤1细弱红翎菜粉碎并反复冻融破碎细胞,得到藻胆蛋白粗提液;2粗提液经过盐析、透析等方式去除杂质;3再经苯基‑琼脂糖膨化柱及葡聚糖G‑150凝胶层析柱的纯化,得到分析纯的藻红蛋白;4将1中分离的藻渣,按一定料液比加入相应浓度氢氧化钾浸泡;5将藻渣酸洗后再漂白再用去离子水洗至pH为7~8;6将5洗净的藻渣中加入一定比例去离子水,水浴加热提取;7趁热过滤得到滤液,冷却后冻融,去除水分,烘干至恒重,得到卡拉胶。本发明以细弱红翎菜为原料,提高了细弱红翎菜的经济价值,实现细弱红翎菜高值化利用。
主权项:1.一种从细弱红翎菜综合提取藻胆蛋白及卡拉胶的方法,其特征在于:具体步骤如下:A.提取纯化藻胆蛋白1将细弱红翎菜按料液比1:1~1:1.5质量体积比g:mL加入去离子水破壁粉碎,放入-20~-30℃的冰箱里,反复冻融3~5次,用50-200目过滤去除藻渣,滤液为制得藻胆蛋白粗提液;2将藻胆蛋白粗提液中加入藻胆蛋白粗提液体积的60%~100%的硫酸铵进行盐析;3将步骤2中的盐析液在转速4000~6000rpm,温度2~8℃条件下,离心5~10min,去除上清液,收集沉淀加100~300mL去离子水溶解,将得到的溶液放入透析袋中透析,每隔2~4h换水,至透析液内不含硫酸根;4将步骤3的透析液以1~3mLmin速度上样至苯基-琼脂糖膨化柱,0.5M硫酸铵洗脱至无色,将膨化柱上吸附的杂蛋白和未被吸附的藻红蛋白清洗干净,再以0.2M~0.025M硫酸铵梯度洗脱藻红蛋白,收集洗脱液;5将洗脱液透析除盐后,浓缩至葡聚糖G-150凝胶层析柱柱体积1%~5%,上样,用0.05M磷酸缓冲液洗脱,收集藻红蛋白洗脱液;即得到纯化的藻红蛋白;6纯化得到的藻红蛋白进行紫外吸收光谱、荧光光谱、SDS-PAGE、Native-PAGE测定;B.从提取藻胆蛋白的藻渣中提取卡拉胶1将提取过藻胆蛋白的藻渣放入容器中,按藻渣湿重料液比1:1~1:5质量体积比g:mL加入质量浓度为4%~8%的氢氧化钾碱液,50~80℃,水浴1~3h;2用50-200目优选100目筛绢过滤,用浓度0.5%醋酸酸洗藻渣至pH7~8,随后用0.5%次氯酸钠漂白藻渣,再用去离子水洗涤藻渣至中性;3再将藻渣与去离子水按料液比1:1~1:5质量体积比g:mL,70~100℃,水浴2~4h;4趁热过滤步骤3提取液,常温凝固后,冷冻24~72h,融化去水,50~70℃烘干,即得到卡拉胶;5制得的卡拉胶进行得率、硫酸酯基、红外光谱的测定。
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