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申请/专利权人：湖北省农业科学院畜牧兽医研究所
摘要：本发明涉及生物工程领域，特别是涉及利用PiggyBac转座酶系统构建无痕工程动物的方法。本发明利用受体基因组天然的“TTAA”四联体序列，以及修复模板上携带的PiggyBac转座酶的识别序列，将基因打靶过程中引入的选择标记基因删除，实现无残留的基因编辑，从而彻底消除生物安全隐患。由此可见，采用本发明所述PiggyBac转座酶系统能实现“无痕”打靶，解决了现有技术无法克服的瓶颈。而且本发明将CRISPRCas9和PiggyBac两个技术联合使用能够实现保真度100％的基因突变和无残留基因编辑，是目前生物安全技术水平最高的方法。
主权项：1.一种利用CRISPRCas9和PiggyBac构建工程猪的方法，其特征在于，包括以下步骤：a、将PCR扩增的IGFⅠ插入PB载体的BsiWⅠ位点和AvrⅡ位点之间，得初级载体；b、PCR扩增猪MSTN基因的左右臂，将扩增得到左臂插入初级载体的EcoRI和NsiI位点，将扩增得到右臂构建到初级载体的AvrⅡ和KpnⅠ位点之间，得到第一重组载体；c、将T11、T31和第一重组载体共转染成纤维细胞后培养，得到第一成纤维细胞；d、将PCR扩增的pbase插入pcDNA3.1的EcoRⅠ和XhoⅠ之间，得第二重组载体；e、将第二重组载体转染至第一成纤维细胞后，进行核移植，得到胚胎；f、将胚胎移植至母猪，得到工程猪；步骤c和步骤d没有时间先后顺序。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 湖北省农业科学院畜牧兽医研究所 利用PiggyBac转座酶系统构建无痕工程动物的方法
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