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申请/专利权人：郑州大学

摘要：本发明公开了针对AChR单亚基抗体的检测试剂盒，该试剂盒包括细胞检测组件━含荧光标记的AChR单亚基抗原的转染细胞。上述试剂盒通过CBA方法制备得到，能够在很大程度上保留AChR的天然构象，较少产生非特异性吸附和交叉反应，且具有灵敏度高、特异性强的特点。本发明还公开了上述检测试剂盒的应用，将上述试剂盒用于检测待测血清中是否存在针对AChR单亚基的自身抗体，从而分析其与MG患者疾病严重程度的关系，为临床治疗提供新指标、新方案。也可以将AChR‑Ab按照亚基进行分类并归纳其临床症状，针对这些症状进行对症治疗将是未来AChR‑MG治疗的首选方向。

主权项：1.针对AChR单亚基抗体的检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中包括细胞检测组件、固定液、通透液、封闭液、洗涤液、阳性对照、阴性对照以及DyLight594偶联的羊抗人IgGFc二抗；所述细胞检测组件的制备包括以下步骤：S1：获取AChR单亚基的目的基因；S2：将步骤S1得到的AChR单亚基目的基因分别与荧光标记载体连接，构建得到真核表达质粒；S3：将步骤S2得到的真核表达质粒分别转染细胞，得到含荧光标记的AChR单亚基抗原的转染细胞，即细胞检测组件；所述AChR单亚基分别为α1、β1、δ、ε、γ，所述荧光标记载体为pCMV6-AC-GFP；所述S2包括以下步骤：1将pCMV6-AC-GFP载体进行双酶切、胶回收得到纯化的pCMV6-AC-GFP载体片段，将步骤S1得到的人AChR单亚基α1、β1、δ、ε、γ目的基因片段分别和纯化的pCMV6-AC-GFP载体片段连接，得到五种连接产物；2将步骤1得到的五种连接产物转化感受态细胞得到五种转化产物，然后将五种转化产物涂布于培养板中，每种均挑选单菌落增菌培养；提取质粒，分别得到五种真核表达质粒pCMV6-AC-GFP-α1、pCMV6-AC-GFP-β1、pCMV6-AC-GFP-δ、pCMV6-AC-GFP-ε、pCMV6-AC-GFP-γ；所述检测试剂盒在使用时，操作过程包括：A将步骤S3得到的细胞检测组件进一步固定、通透、封闭；B将步骤A得到的细胞与待测血清共同孵育，进行免疫反应；所述步骤B的过程包括：a将血清标本进行比例稀释；b将步骤A通透、封闭后的细胞与步骤a稀释后的血清混合并共同孵育；c步骤b孵育完成后对细胞进行洗涤，然后加入DyLight594偶联的羊抗人IgGFc二抗孵育，孵育完成后再次洗涤，使用荧光显微镜进行观察。

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