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摘要：本发明公开了一种具有排除非特异性荧光干扰的GAD65抗体检测系统，包括重组质粒构建单元、细胞转染单元、免疫荧光测定单元和流式细胞术检测单元，本发明利用分子克隆技术，通过构建pCMV‑AC‑GFP‑GAD65真核表达载体转染HEK293细胞，表达蛋白为GAD65的全长蛋白，具有抗体识别的空间构象表位，保持了目标抗原蛋白的三维空间构象，最大程度还原了抗原抗体结合的天然状态，由于载体本身带有绿色荧光蛋白GFP标签，可在转染细胞后直接观察到细胞转染效率，在检测抗体的时候通过对比双色荧光的位置及数量来排除非特异性荧光，提高特异性，并结合免疫荧光测定法和流式细胞术，可以对抗体进行定性和定量检测，对患者治疗疗效的评估具有重要指导价值。
主权项：1.一种具有排除非特异性荧光干扰的GAD65抗体检测系统，包括重组质粒构建单元、细胞转染单元、免疫荧光测定单元和流式细胞术检测单元，其特征在于：所述的检测系统通过所述重组质粒构建单元采用PCR技术扩增获得全长GAD65的基因片段，通过双酶切、胶回收、T4DNA酶连接，克隆至真核表达载体pCMV-AC-GFP上，构建用于表达人GAD65蛋白的重组质粒，通过所述细胞转染单元用构建的真核表达载体转染HEK293细胞，使细胞过表达GAD65蛋白，以转染的细胞作为基质，与待测血清或待测脑脊液中的抗体进行结合，通过所述免疫荧光测定单元采用免疫荧光法对待测血清或待测脑脊液进行阳性判定，并通过所述流式细胞术检测单元定量检测双阳性细胞的含量。
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百度查询： 郑州大学 一种具有排除非特异性荧光干扰的GAD65抗体检测系统
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