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申请/专利权人：深圳市罗湖区人民医院

摘要：本发明公开一种检测ADGRG6高频突变位点的方法及试剂盒，其中，所述试剂盒包括chr.6:142,706,206GA突变位点的引物GA‑F，引物GA‑R及探针GA‑PF；chr.6:142,706,209CT突变位点的引物CT‑R，引物CT‑F及探针CT‑PR；内参引物Control‑F，内参引物Control‑R及探针Control‑PR。本发明提供的试剂盒能够有效检测ADGRG6高频突变位点的突变情况，其具有操作简单、灵敏度高、特异性高和成本低等优点，非常适用于临床ADGRG6序列高频突变位点的检测。

主权项：1.一种检测ADGRG6突变位点的试剂盒，其特征在于，包括chr.6:142,706,206GA突变位点的引物GA-F，引物GA-R及探针GA-PF；chr.6:142,706,209CT突变位点的引物CT-R，引物CT-F及探针CT-PR；内参引物Control-F，内参引物Control-R及探针Control-PR；所述引物GA-F的序列如SEQID.1所示；所述引物GA-R的序列如SEQID.2所示；所述探针GA-PF的序列为5’6FAM-CCTCTGiXNA_TGGTATTiXNA_CTiXNA_CCCTiXNA_CCAG-BHQ-13’，其中iXNA_T、iXNA_C及iXNA_G表示锁核苷酸修饰，所述iXNA为LNA；所述引物CT-R的序列如SEQID.4所示，所述引物CT-F的序列如SEQID.5所示；所述探针CT-PR的序列为5’6FAM-CTACTGiXNA_GCTAGAGTiXNA_CCATGiXNA_TGAAAiXNA_TATG-BHQ-13’，其中iXNA_T、iXNA_C及iXNA_G表示锁核苷酸修饰，所述iXNA为LNA；所述内参引物Control-F的序列如SEQID.7所示，所述内参引物Control-R的序列如SEQID.8所示；所述探针Control-PR的序列为5’6HEX-TGTACCTTGGATTCACTGGCCTGTC-BHQ-13’；所述试剂盒用于检测ADGRG6突变位点时，包括步骤：采用所述试剂盒对待测样品进行PCR扩增，得到扩增后样品；测量扩增后样品的ΔCt值=Ct值FAM-Ct值HEX；若chr.6:142,706,206GA突变位点体系扩增后样品的ΔCt值14，则判定待测样品为chr.6:142,706,206GA突变位点突变型，若扩增后样品的ΔCt值14，则判定待测样品为chr.6:142,706,206GA突变位点野生型；若chr.6:142,706,209CT突变位点体系扩增后样品的ΔCt值14，则判定待测样品为chr.6:142,706,209CT突变位点突变型，若扩增后样品的ΔCt值14，则判定待测样品为chr.6:142,706,209CT突变位点野生型；所述试剂盒的反应体系包括反应体系1和反应体系2，所述反应体系1包括：10×PCR缓冲液5μl，MgCl240mM4μl，dNTP2.5mM2.5μl，引物GA-F10pM2.5μl，引物GA-R10pM2.5μl，探针GA-PR10pM0.5μl，Control-F10pM0.2μl，Control-R10pM0.2μl，Control-PR10pM0.5μl，HSTaq酶0.2μl，DNA模板5μl，添加无菌双蒸水至反应体系体积为50μl；所述反应体系2包括：10×PCR缓冲液5μl，MgCl240mM4μl，dNTP2.5mM2.5μl，引物CT-F10pM2.5μl，引物CT-R10pM2.5μl，探针CT-PF10pM0.5μl，Control-F10pM0.2μl，Control-R10pM0.2μl，Control-PR10pM0.5μl，HSTaq酶0.2μl，DNA模板5μl，添加无菌双蒸水至反应体系体积为50μl。

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