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申请/专利权人:江西省超级水稻研究发展中心(江西省农科院海南水稻育种中心)
摘要:本发明属于水稻育种技术领域,具体涉及一种利用OsNramp5基因在水稻突变体库中快速筛选低镉突变体的方法。由于OsNramp5基因功能失活可以获得低镉性状的突变体,提供了一种利用OsNramp5基因在水稻突变体库中快速筛选低镉突变体的方法。该方法通过建立突变体库群体种子,然后种植,培养,对幼苗培养一定时期后进行表型检测,从中筛选候选目标突变株,通过测序对目标突变株OsNramp5基因序列进行突变检测以快速锁定目标突变株,最后对目标突变株镉积累特性进行鉴定,筛选得到低镉突变体。本发明的方法成本低,过程简单,只需要对种子进行发芽筛选,而且筛选获得的突变体都是纯合的,可以节省加代繁殖获得纯合个体的时间和品种选育进程,提高了效率。
主权项:1.一种利用OsNramp5基因在水稻突变体库中快速筛选低镉突变体的方法,其特征在于,所述OsNramp5基因的国际通用基因识别符号为Os07g0257200、LOC_Os07g15370或LOC4342859中的至少一种,所述低镉突变体为OsNramp5基因功能失活而获得低镉性状的突变体;所述方法具体包括以下步骤:S1:从突变体库中筛选突变体种子置于96孔PCR(PolymeraseChainReaction,聚合酶链式反应)反应板中;S2:将突变体库群体种子浸入缺锰元素的培养液,然后在20℃-35℃条件下对种子进行发芽并对幼苗进行培养;S3:幼苗培养至第6完全叶伸出后进行表型检测,从中筛选候选目标突变株;S4:通过一代测序对候选目标突变株OsNramp5基因序列进行突变检测以快速锁定目标突变株,然后对目标突变株镉积累特性进行鉴定,以确认其低镉性状,从而得到低镉突变体;所述S1中每一批筛选时加入阳性对照和阴性对照,选择其它品种背景已知OsNramp5无功能突变体种子作为阳性对照,突变体库来源原始野生型品种做阴性对照。
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