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CD56dimCD16+NK细胞培养试剂盒、培养方法及应用 

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申请/专利权人:深圳泽医细胞治疗集团有限公司

摘要:本发明提供了一种CD56dimCD16+NK细胞培养试剂盒、培养方法及应用,试剂盒包括刺激因子A液、活化培养基B液和扩增培养基C液;刺激因子A液包括CD16抗体、NKp30抗体、NKp44抗体和NKp46抗体的至少一种;活化培养基B液包括IL‑2、IL‑7、IL‑12、IL‑15、IL‑21、L‑抗坏血酸、5‑氨基乙酰丙酸、A群链球菌OK432、EuphoscopinC细胞增强剂和自体血浆;扩增培养基C液包括IL‑2、IL‑12、IL‑15、L‑抗坏血酸、FMS样酪氨酸激酶3配体、环糊精和自体血浆。基于本发明的培养试剂盒和培养方法,将人外周血单个核细胞在体外共培养2~3周后,能使CD56dimCD16+NK细胞的占比>90%,表达靶向肺部标志性趋化因子CCR5和CXCR3的阳性细胞比例均>90%,且对A549肺癌细胞的杀伤率>90%。

主权项:1.一种CD56dimCD16+NK细胞培养试剂盒,其特征在于,包括:刺激因子A液、活化培养基B液和扩增培养基C液;所述刺激因子A液包括CD16抗体、NKp30抗体、NKp44抗体和NKp46抗体;所述活化培养基B液包括IL-2、IL-7、IL-12、IL-15、IL-21、L-抗坏血酸、5-氨基乙酰丙酸、A群链球菌OK432、EuphoscopinC细胞增强剂和自体血浆;所述扩增培养基C液包括IL-2、IL-12、IL-15、L-抗坏血酸、FMS样酪氨酸激酶3配体、环糊精和自体血浆;在所述活化培养基B液中,IL-2的浓度为200~500UmL,IL-7的浓度为3000~7500UmL,IL-12的浓度为30~50ngmL,IL-15的浓度为50~100ngmL,IL-21的浓度为30~50ngmL,L-抗坏血酸的浓度为50~100μgmL,5-氨基乙酰丙酸的浓度为40~100uM,A群链球菌OK432的浓度为0.05~0.1KEmL,EuphoscopinC细胞增强剂的浓度为3~10μM,自体血浆的浓度为1~10%;在所述扩增培养基C液中,IL-2的浓度为400~1000UmL,IL-12的浓度为0.5~1ngmL,IL-15的浓度为40~100ngmL,L-抗坏血酸的浓度为50~100μgmL,FMS样酪氨酸激酶3配体的浓度为50~100ngmL,环糊精的浓度为3~10mM,自体血浆的浓度为0.5~5%。

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权利要求:

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