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申请/专利权人：华中农业大学
摘要：一种高表达猪PBMCs细胞因子的饲养层细胞构建方法，包括以下步骤：1从猪的外周血单个核细胞中克隆细胞因子，设计同源臂引物并连接慢病毒载体，构建含有细胞因子的重组质粒；2使用转染的方式，利用阳离子转染试剂，将构建的重组质粒同辅助质粒共转染包装慢病毒的细胞；3用包装的慢病毒感染饲养层细胞。本发明将猪IL‑2、IL‑4和IFN‑α基因插入到猪PK‑15细胞基因组内，构建能稳定表达并分泌细胞因子的饲养层细胞，替代猪外周血单个核细胞培养的添加物。所构建的饲养层细胞适合大规模培养，同时也极大地降低了培养成本，操作技术简单，适用性广泛，可广泛用于猪外周血单个核系和猪特定免疫细胞的培养。
主权项：1.一种高表达猪PBMCs细胞因子IFN-α4的饲养层细胞构建方法，其特征在于包括以下步骤：1从猪的外周血单个核细胞中克隆细胞因子IFN-α4，设计同源臂引物并连接核苷酸序列如SEQIDNo.7所示的慢病毒载体pHKO-EF1a，构建含有细胞因子IFN-α4的重组质粒；2使用转染的方式，利用阳离子转染试剂，将构建的重组质粒同辅助质粒psPAX2和pMD2.G共转染包装慢病毒的细胞293T细胞，所述重组质粒与辅助质粒psPAX2、pMD2.G的用量分别为2μg、2μg、1μg；所述重组质粒与辅助质粒的总量与阳离子转染试剂的比例为1：1～4μg：μl；3用包装的慢病毒感染饲养层细胞猪肾细胞PK-15，所述同源臂引物的序列如下：猪IFN-α4F同源臂引物：gaacacaggaccggttctagaATGGCCCCAACCTCAGCC猪IFN-α4R同源臂引物：gaagtttgttgcgccggatccTCACTCCTTCTTCCTGAATC。
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百度查询： 华中农业大学 一种高表达猪PBMCs细胞因子的饲养层细胞构建方法
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