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申请/专利权人：浙江理工大学

摘要：本发明涉及纺织品文物检测领域，公开了一种用于狐狸毛角蛋白检测的免疫传感器修饰电极的制备方法。本发明将AgNPs、碳纳米管、CuO通过层层组装的方法滴涂在电极表面，从而形成稳定的修饰电极，该电极对狐狸毛角蛋白具有出色的检测能力。

主权项：1.一种用于狐狸毛角蛋白检测的免疫传感器修饰电极的制备方法，其特征在于包括以下步骤：步骤1：银纳米粒子的制备：将30-50mL超纯水配制的0.01%-0.05%AgNO3溶液装入锥形瓶中，搅拌加热，沸腾持续2-4min后迅速加入1-1.5mL质量分数为1%-2%的柠檬酸钠溶液，继续搅拌加热至溶液变为淡黄色，继续加热5-10min后停止加热，搅拌使其冷却至室温，获得的银纳米粒子；步骤2：碳纳米管的制备:称取20-40mg的多壁碳纳米管溶解于10-20mLN，N-二甲基甲酰胺溶液中，超声，制得黑色的多壁碳纳米管悬浮液；步骤3：纳米CuO的制备：取硝酸铜溶液和碳酸钠溶液混匀，并超声分散0.5-1h，在160℃-200℃的温度下反应4h-8h后，真空抽滤，将得到的粉末先后用去离子水、无水乙醇分别洗涤，最后在80℃-100℃中干燥1.5h-2h，得到纳米CuO；步骤4：纳米CuO碳纳米管复合物的制备：将等量纳米CuO加入多壁碳纳米管悬浮液中，超声5-6h，使其充分分散，得到纳米CuO碳纳米管复合物；步骤5：称取纳米级氧化铝，沿着8字形将玻碳电极在麂皮用15-25nm氧化铝悬浮浆打磨8-15min，然后分别用蒸馏水，无水乙醇、蒸馏水各自超声清洗，确保电极表面洁净后即可开始自组装过程；步骤6：取3-5ul银纳米粒子悬浮液垂直涂滴在GCE电极表面，35-40℃恒温箱中烘干得到纳米银修饰的GCE电极；继续涂滴3-5ul的纳米CuO碳纳米管复合物，35-40℃恒温箱中烘干，即制得AgNPs碳纳米管CuOGCE电极；步骤7：将电极置于0.04-0.06molL3-羟基丙酸水溶液，并于35-37℃下恒温箱反应1.5-2h；将修饰有3-羟基丙酸的电极在含有0.04-0.06molLEDC、0.02-0.04molLNHS缓冲液中并置于35-37℃下恒温箱孵育0.5-1h，将3-羟基丙酸的末端羧基转化为活性NHS酯；再取5-7ul5-10ugmL狐狸毛角蛋白特异性抗体溶液，滴涂至电极表面，35-37℃下恒温箱中烘干，用PBS缓冲液洗净未固定的抗体，得抗体AgNPs碳纳米管CuOGCE修饰电极；随后，用BSA溶液封闭30-40min，以封闭电极表面可能存在的非特异性结合位点，取出后用PBS缓冲液洗净，晾干，得免疫传感器修饰电极。

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