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申请/专利权人：中国热带农业科学院热带作物品种资源研究所;中国热带农业科学院海口实验站

摘要：本发明公开了一种木棉胚再生途径和器官发生途径获得组培苗的方法，包含胚再生途径：以茎段为外植体，诱导胚性愈伤，分化出不定芽，生根获得无菌苗；以及器官发生途径：以无菌苗茎尖为外植体，诱导分化不定芽，不定芽再生根获得无菌苗。本发明提供了一种适合木棉诱导再生、苗增殖的培养基和培养条件，建立了木棉胚再生和器官发生途径获得组培苗的方法，该方法苗增殖系数较高，可选外植体丰富，为木棉新种质创制、优良株系快速繁育及胚发生途径转基因育种提供了技术支持。

主权项：1.一种木棉胚再生途径和器官发生途径获得组培苗的方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、获得外植体：将消毒后的木棉种子接种于苗培养基，培养获得6-8cm无菌幼苗，将无菌幼苗去除根和子叶，获得下胚轴和茎芽，下胚轴用于诱导愈伤组织，茎芽用于诱导分化不定芽，所述苗培养基为12-1MS+15-25gL葡萄糖或蔗糖+7-8gL卡拉胶，pH5.8-6.0；S2、木棉愈伤组织诱导培养：将步骤S1的下胚轴转入愈伤组织诱导培养基，暗培养20-30天，脱分化获得愈伤组织，所述愈伤组织诱导培养基为12MS+25-35gL葡萄糖+0.1-0.2mgL6-BA+0.05-0.15mgL2,4-D+7-8gL琼脂粉，pH5.8-6.0；S3、木棉愈伤组织分化出苗：将步骤S2的愈伤组织转入分化培养基，光照培养30-50天获得不定芽；S4、木棉茎芽诱导分化不定芽：将步骤S1的茎芽转入分化培养基，光照培养20-45天，茎芽诱导分化出不定芽；S5、循环诱导分化增殖培养：将步骤S3或步骤S4的不定芽作为外植体转入分化培养基，光照培养获得新的不定芽，将获得的不定芽用于重复诱导分化增殖培养或进行生根培养；S6、生根培养：将步骤S3、步骤S4或步骤S5的不定芽转入生根培养基进行生根培养获得组培苗，所述生根培养基为：12MS+0.2-1mgLNAA+25-35gL葡萄糖+7-8gL卡拉胶，pH5.8-6.0；步骤S3、步骤S4和步骤S5的分化培养基为：12MS+25-35gL葡萄糖+1-2gL花宝+7-8gL琼脂粉+0.5-0.6mgLIBA+0.1-0.2mgLKT+1-2mgL6-BA，pH5.8-6.0。

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