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申请/专利权人：浙江大学
摘要：本发明提供了一种百山祖冷杉蔗糖合成酶基因和产品及用途。本发明首次从百山祖冷杉中克隆得到百山祖冷杉蔗糖合成酶基因，并确定其核苷酸序列SEQIDNO.1以及氨基酸序列SEQIDNO.2，填补了现有技术中对百山祖冷杉蔗糖合成酶及其生物合成基因未知的空白，为百山祖冷杉的相关研究提供了理论和基础支持。此外，发明人通过将百山祖冷杉蔗糖合成酶基因重组得到重组载体和工程菌，并且成功纯化得到百山祖冷杉蔗糖合成酶基因，在体外酶活实验中该酶可将蔗糖和尿苷二磷酸催化合成尿苷二磷酸葡萄糖及其逆向反应，是一种双向反应酶，在生物合成及其代谢途径中具有重要意义。
主权项：1.包含百山祖冷杉蔗糖合成酶基因的重组载体工程菌在生产蔗糖、尿苷二磷酸和或尿苷二磷酸葡萄糖中的应用，其特征在于，所述包含百山祖冷杉蔗糖合成酶基因的重组载体工程菌通过如下方法构建获得：提取百山祖冷杉试管苗根部组织的RNA，采用逆转录酶M-MLV，逆转录反应合成cDNA；以该cDNA为模板，扩增引物如下：正向引物为：5’-ATGGTTGCTGCAACGCTGACC-3’；反向引物为：5’-CTAGTCTGTACTCTTCTCTTCAAT-3’；利用Vazyme公司PhantaMaxSuper-FidelityDNA聚合酶，进行PCR扩增；PCR条件为：98℃，2min；98℃，10sec；55℃，15sec；72℃，2min；35个循环；72℃延伸5min；采用琼脂糖凝胶电泳胶回收试剂盒的方法回收目标基因片段，将目标片段进行TA克隆，连接到pClone007载体上，然后将其转化到大肠杆菌DH5α克隆菌株中，采用菌落PCR进行阳性克隆筛选，得到将百山祖冷杉蔗糖合成酶基因插入到pClone007克隆载体的重组载体以及将重组载体成功转化至原核细胞大肠杆菌DH5α中的阳性工程菌。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 浙江大学 百山祖冷杉蔗糖合成酶基因和产品及用途
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