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申请/专利权人：浙江大学

摘要：本发明涉及一种用于冷链物流过程果蔬的冷害评价及预测方法，解决当前冷链物流过程果蔬的冷害程度无法准确评价，果蔬在冷链物流过程中冷害的发展趋势不清，冷害发生后影响果蔬价值的问题。本方法采用化学荧光探针对果蔬中的游离Ca2+进行标记，采用不同的抗体分别对不同的果蔬中五种果胶分别进行标记，然后采用荧光图谱进行归一化分析不同位置的游离Ca2+和不同种的果胶的相互反应的预期值，不仅可以评价果蔬当前阶段的冷害情况，而且可以对未来一段时间内的冷害趋势进行预测，作为冷链物流规划的依据，减少果蔬冷害的发生。

主权项：1.一种用于冷链物流过程果蔬的冷害评价及预测方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1、对果蔬进行随机抽样，抽取果蔬样本X个，并依次编号为：1、2、3……X；步骤2、对于抽取的每一个样本，取1cm3样本，获取一张徒手切片；随后将剩余样本用石蜡包埋，获取连续5张石蜡切片；步骤3、使用化学荧光探针，对每个样本获取的徒手切片中的游离Ca2+进行标记；对每个样本获取的5张石蜡切片分别使用LM20、JIM7、JIM5、LM19、2F4抗体，对高甲酯化HG、部分甲酯化HG、低甲酯化HG、未甲酯化HG和蛋盒结构进行免疫组织化学荧光标记；步骤4、通过激光共聚焦显微镜获取样本中高甲酯化HG、部分甲酯化HG、低甲酯化HG、未甲酯化HG和蛋盒结构的抗体标记荧光分布图，分别统计该批次全部样本每种HG结构在荧光分布图中的薄壁细胞区域的荧光强度总和FALL；然后再统计一下全部样本每种HG结构在荧光分布图中，荧光强度值最暗的10％部分的平均值FUNIT，视为一个抗体标记单元；随后用荧光强度总和除以标记单元的荧光强度值，得出每种HG结构的归一化含量值；最后再乘以每种抗体单元识别的果胶单元骨架个数，计算该批次全部样本每种HG果胶结构的含量系数C，此处蛋盒结构也认为是果胶的一种： a、b、c、d、e为2F4、LM19、JIM5、JIM7、LM20抗体1个单位识别的果胶单元骨架个数，分别为9、5、6、6、5；步骤5、通过激光共聚焦显微镜获取样本徒手切片中游离Ca2+的荧光分布图，分别统计该批次全部样本中游离Ca2+在荧光分布图中的胞外区域E的荧光强度总和FE、胞内区域I的荧光强度总和FI,胞外区域的面积SE和胞内区域的面积SI；根据公式，计算该批次全部样本胞外区域和胞内区域游离Ca2+的平均浓度系数，分别记为ECa和ICa；ECa＝FESE*fICa＝FISI*ff为归一化系数；步骤6、根据所获得的系数，计算样本中低甲酯化HG和未甲酯化HG占总果胶含量的占比，分别记作：PJIM5和PLM19；计算样本中胞外区域和胞内区域游离Ca2+浓度比重，分别记作和进一步，根据公式计算果蔬短期发生冷害的系数PS、中期发生冷害的系数PM、长期发生冷害的系数PL、抗冷性系数RTC： Ps≤0.1时候，认为1周内果蔬抗冷性较好，当Ps＞0.1时候，值越大，则代表冷链物流过程1周内，该批次果蔬发生冷害的概率越大；PM≤0.3时候，认为3周内果蔬抗冷性较好，当PM＞0.3时候，值越大，则代表冷链物流过程3周内，该批次果蔬发生冷害的概率越大；PL≤0.4时候，认为4周内果蔬抗冷性较好，当PL＞0.4时候，值越大，则代表冷链物流过程4周内，该批次果蔬发生冷害的概率越大；RTC≤0.4时候，认为当前果蔬品质较好，没有冷害发生；当RTC＞0.4时候，果蔬冷害已经发生；RTC值越大，冷害程度越高。

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