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申请/专利权人：天津科技大学;天津嘉氏堂科技有限公司

摘要：本发明属于细胞生物学和药物筛选技术领域，尤其涉及一种用于高通量筛选TRPV1受体抑制剂的细胞系及其构建方法和应用。本发明提供的细胞系稳定表达GCaMP8m序列和TRPV1受体序列，所述GCaMP8m序列存在于细胞质中，所述TRPV1受体序列存在于细胞膜上，所述GCaMP8m序列和TRPV1受体序列的摩尔比为1：1。该细胞系能够有效排除其他钙离子通道对实验的干扰，准确而客观地反映TRPV1的通道活性，克服了现有技术无法准确反映TRPV1通道活性的缺点，利用该细胞系能够进行TRPV1受体抑制剂的高通量筛选。

主权项：1.一种用于高通量筛选TRPV1受体抑制剂的细胞系，其特征在于，所述细胞系稳定表达GCaMP8m序列和TRPV1受体序列，所述GCaMP8m序列存在于细胞质中，所述TRPV1受体序列存在于细胞膜上，所述GCaMP8m序列和TRPV1受体序列的摩尔比为1：1；所述细胞系的构建方法具体包括以下步骤：S1、利用EcoRI和NotI内切酶对GCaMP8m-P2A基因片段和pLVX-IRES-puro载体进行双酶切，将所得酶切产物纯化回收后通过T4DNA连接酶将纯化后的酶切产物连接形成GCaMP8m-P2A慢病毒载体；所述GCaMP8m-P2A基因片段的序列如SEQIDNO.1所示；S2、利用NotI和BamHI内切酶对所述GCaMP8m-P2A慢病毒载体和带有NotI酶切位点及BamHI酶切位点的TRPV1片段进行双酶切，将所得酶切产物纯化回收后通过T4DNA连接酶将纯化后的酶切产物连接形成GCaMP8m-P2A-TRPV1过表达载体；所述带有NotI酶切位点和BamHI酶切位点的TRPV1片段的序列如SEQIDNO.2所示；S3、将所述GCaMP8m-P2A-TRPV1过表达载体与psPAX2和pMD2.G包装质粒共转染293T细胞，进行慢病毒包装、扩增，得到GCaMP8m-P2A-TRPV1病毒；S4、用所述GCaMP8m-P2A-TRPV1病毒侵染细胞，然后进行细胞筛选，获得GCaMP8m-P2A-TRPV1稳定表达的细胞系，即为用于高通量筛选TRPV1受体抑制剂的细胞系。

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