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摘要：本发明提供了一种同时检测乳汁中VK1、MK‑4和MK‑7的方法及萃取剂、试剂组合的用途，创新使用酶解法，脂肪酶和磷脂酶对乳汁进行酶解，增加乳汁中VK1、MK‑4和MK‑7的提取率，增加检测准确度，降低了基质效应，较文献报道降低VK1、MK‑4和MK‑7的定量下限10~70倍；采用由碳酸氢钠、磷酸盐缓冲液和三乙胺组成的缓冲液，增加了酶解效率，酶解后采用特定的液液萃取剂进行液液萃取，萃取剂包括异辛烷，一方面提高对VK1、MK‑4和MK‑7的提取率，另一方面减少了杂质的干扰，使得粗酶酶解的效果高于精制酶酶解效果，降低成本，便于酶制剂的保存和使用，使得本发明的方法更具可推广性。
主权项：1.一种液相色谱串联质谱同时检测乳汁中VK1、MK-4和MK-7的方法，其特征在于，由以下步骤组成：S1酶解：脂肪酶和磷脂酶对乳汁样本进行酶解；S2液液萃取；S3离心，取上清液吹干，复溶；S4液相色谱串联质谱上机检测；步骤S1所述脂肪酶和磷脂酶为粗酶，所述脂肪酶为LipozymeTL100L，所述磷脂酶为LecitaseUltra，所述粗酶制剂含有稳定剂，所述稳定剂为山梨醇；步骤S2所述萃取能够去除粗酶酶解后的乳汁中对检测的干扰物，所述酶解后的乳汁中对检测的干扰物为脂肪酸和溶血磷脂，所述粗酶中对检测的干扰物为山梨醇；步骤S2所述萃取的萃取剂为正己烷、正庚烷和异辛烷的混合液，正己烷、正庚烷、异辛烷体积比为1:1:1。
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百度查询： 湖南凯莱谱生物科技有限公司 凯莱谱(苏州)生物科技有限公司 一种同时检测乳汁中VK1、MK-4和MK-7的方法及萃取剂、试剂组合的用途
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