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申请/专利权人：华中科技大学

摘要：本发明涉及一种基于高内涵细胞成像的抗衰老成分高通量筛选方法，属于天然药物化学及医药技术领域。本发明首先通过建立抗衰老化合物文库，同时基于多种细胞模型，建立不同细胞和不同诱导方式的衰老细胞模型，并以此为基础，进行抗衰老化合物的三轮筛选；最后在体内外细胞衰老模型中验证目标化合物的抗衰老效果。本发明基于高内涵细胞成像技术，建立了一种多模型快速、高灵敏、高通量、系统表征和效果验证的抗衰老化合物筛选和验证方法，可以实现高通量、高效率和高准确性的抗衰老化合物筛选。

主权项：1.一种基于高内涵细胞成像的抗衰老成分高通量筛选方法，其特征在于，包括以下步骤：1将待筛选化合物加入复制性应激引起的自然衰老细胞模型作为初筛处理组，将未加入待筛选化合物的复制性应激引起的自然衰老细胞模型作为初筛对照组；然后对所述初筛处理组和初筛对照组进行细胞衰老β-半乳糖苷酶染色和高内涵细胞成像；初筛处理组相比于初筛对照组，同时满足以下条件的化合物作为初筛化合物：细胞总的数量未减少、细胞衰老β-半乳糖苷酶染色的细胞占比降低、细胞核面积减小、细胞面积减小、细胞长宽比增大；2将步骤1得到的每一种初筛化合物分别加入到以下模型作为复筛处理组：复制性应激引起的自然衰老细胞模型、H2O2处理模型、依托泊苷处理模型、自然衰老联合H2O2并联合依托泊苷的混合处理模型；将未加入待筛选化合物的对应模型作为复筛对照组；然后对所述复筛处理组和复筛对照组进行细胞衰老β-半乳糖苷酶染色、高内涵细胞成像和基于乳酸脱氢酶LDH释放的细胞毒性检测；复筛处理组相比于复筛对照组，同时满足以下条件的化合物作为复筛化合物：乳酸脱氢酶LDH释放值至多在一个模型中增大；细胞总的数量、细胞核面积和衰老β-半乳糖苷酶染色的细胞占比这三个指标至少在两个模型中减小；3将步骤2得到的每一种复筛化合物以不同浓度分别加入到原代细胞建立的衰老模型中作为三筛处理组，将未加入待筛选化合物的对应模型作为三筛对照组；然后对所述三筛处理组和三筛对照组进行细胞衰老β-半乳糖苷酶染色和基于乳酸脱氢酶LDH释放的细胞毒性检测；三筛处理组相比于三筛对照组，同时满足以下条件化合物作为最终筛选得到的化合物：化合物在0.1μM–1000μM的浓度梯度范围内，衰老β-半乳糖苷酶染色的细胞占比均降低，且乳酸脱氢酶LDH的释放均减少。

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