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申请/专利权人：广东省农业科学院动物科学研究所
摘要：本发明属于生物技术领域，公开了一种猪肠类器官与产肠毒素性大肠杆菌或巨噬细胞共培养体系的构建方法，包括如下步骤：步骤1：准备产肠毒素性大肠杆菌或巨噬细胞；步骤2：取仔猪空肠前段组织进行处理得到肠隐窝；步骤3：用稀释后的基质胶重悬肠隐窝，将产肠毒素性大肠杆菌或巨噬细胞、肠隐窝接种于提前温育的孔板上，于孔板中加入类器官生长培养基，培养。本发明的培养基针对于猪肠类器官与产肠毒素性大肠杆菌或巨噬细胞共培养体系的生长特点，选用了多种生长因子成份进行调和、优化了孔板中大肠杆菌和巨噬细胞的浓度，经过不断优化培养基中生长因子的配比，使猪肠类器官与产肠毒素性大肠杆菌、巨噬细胞能够有效地进行接触性共培养。
主权项：1.一种猪肠类器官与产肠毒素性大肠杆菌或巨噬细胞共培养体系的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤1：准备产肠毒素性大肠杆菌或巨噬细胞；步骤2：取仔猪空肠前段组织进行处理得到肠隐窝；步骤3：采用类器官生长培养基稀释减生长因子的基质胶，用稀释后的基质胶重悬肠隐窝，按照低于1*105个产肠毒素性大肠杆菌10ul或500-1000个巨噬细胞10ul、10-20个肠隐窝10ul接种于提前温育的孔板上，静置，使基质胶凝固，于孔板中加入类器官生长培养基，置于37℃含5%CO2培养箱中，培养，每两天更换一次类器官生长培养基；所述类器官生长培养基由如下成分组成：基础培养基：AdvancedDMEMF12；L-WRNcells条件性培养基40-50vol%；100X规格的N21倍体积；100X规格的B27-supplement1倍体积；50ngmlEGF；10μMY27632；0.5μMLY2157299；10μMSB202190；10μMCHIR99021；1mMHEPES；1mMN-acetylcysteine；100X规格的Glutamax1倍体积；1mMvalproicacid。
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百度查询： 广东省农业科学院动物科学研究所 猪肠类器官与产肠毒素性大肠杆菌或巨噬细胞共培养体系的构建方法
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