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申请/专利权人：华中农业大学
摘要：本发明属于微生物检测技术领域，具体涉及一种免提取、免扩增、高灵敏度的活菌定量检测方法及其应用，用于无需核酸提取和扩增即可高灵敏定量检测活菌。所述免提取是指不需要蛋白酶处理，利用噬菌体直接将靶标菌株核酸从活细胞中释放出来，其中涉及的活菌检测提高了检测准确性，涉及的免提取简化了试验操作并降低了成本；本发明采用DNA和ATP协同触发PfAgo酶切割荧光探针实现信号增强，无需对靶标菌株核酸进行扩增即可实现高灵敏检测，避免了交叉污染的风险；本发明中PfAgo酶引导链的设计和目标序列选择不受PAM限制，降低了引物设计复杂性；本发明方法线性范围为102‑107CFUmL，检出限为20CFUmL，检测灵敏度高，检测结果准确，适用于食源性病原菌的活菌定量检测。
主权项：1.一种活菌检测试剂盒，其特征在于，包括：引导PfAgo酶靶向细菌的gDNA，具体为如序列SEQIDNO.1所示的gDNA-1、如序列SEQIDNO.2所示的gDNA-2以及如序列SEQIDNO.3所示的gDNA-3；引导PfAgo酶切割荧光探针1的gDNA，所述gDNA为gDNA-1、gDNA-2和gDNA-3引导PfAgo酶靶向细菌切割下来的部分DNA片段，具体为如序列SEQIDNO.4所示的gDNA-4；引导PfAgo酶切割荧光探针2的gDNA，所述gDNA为与ATP适配体杂交构成二价适配体的寡核苷酸序列，具体为如序列SEQIDNO.5所示的gDNA-5；用于构建针对ATP的二价适配体，所述二价适配体由两条ATP适配体序列和一条寡核苷酸序列杂交所得，具体为如序列SEQIDNO.6所示的ATP适配体以及具体为如序列SEQIDNO.5所示的寡核苷酸序列；带有荧光基团和猝灭基团的荧光探针，具体为如SEQIDNO.7所示的荧光探针1以及如序列SEQIDNO.8所示的荧光探针2。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 华中农业大学 一种免提取、免扩增、高灵敏度的活菌定量检测方法及其应用
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