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申请/专利权人：东北农业大学

摘要：本发明提供一种土壤中氮组分含量的测定方法，利用酸解法‑凯氏定氮法测定氮组分技术的试剂盒，属于土壤试验检验测定技术领域。本发明的测试试剂成分包括K2SO4、CuSO4·5H2O和Se粉混合剂，柠檬酸与水和茚三酮混合剂，经过酸解法后，通过将样品与试剂按一定的体积比混合,使之发生一系列的酶促反应，再将反应物通过凯氏定氮仪测定各氮组分含量。该测定方法将不同氮组分所需试剂化繁为简进行整合，方便测定者在实验中快速、简便的配置不同酸解液所需试剂，进而能够快速、精确测定不同氮组分；并且该方法为测定土壤氮组分简化配药步骤，显著提高了土壤氮组分测定效率，可以进行推广。

主权项：1.一种土壤中氮组分含量的测定方法，其特征在于步骤如下：步骤一，试剂准备：1氢氧化钠水溶液的制备，用氢氧化钠固体和蒸馏水分别制备浓度为0.5molL、1molL、5molL的氢氧化钠水溶液，备用，2磷酸-硼砂缓冲液的制备，在1L容量瓶中加入125g磷酸-硼砂粉剂，用900mL水溶解后，接着用水定容至1L，得到pH值为11.2的磷酸-硼砂缓冲液储存在密封瓶中，备用，其中125g磷酸-硼砂粉剂由100gNa3P04·12H20与25gNa2B407·10H20组成，3酸解液的制备，先将待测土壤样品过100目筛，取4g加入消煮管中，再加入0.1mL正辛醇和10mL浓度为6molL的盐酸水溶液，混合均匀后在温度为117-123℃下水解回流12h，接着过滤得到过滤液，过滤液用1molL和5molL的氢氧化钠水溶液调节pH值至2，再逐滴加入1molL的氢氧化钠水溶液，调节pH值至6.2-6.8，用蒸馏水定容至100mL，得到酸解液，放冰箱，备用，4空白水解液的制备：在消煮管中加入0.1mL正辛醇和10mL浓度为6molL的盐酸水溶液，混合均匀后在温度为117-123℃下水解回流12h，接着过滤得到过滤液，过滤液用1molL和5molL的氢氧化钠水溶液调节pH值至2，再逐滴加入0.5molL的氢氧化钠水溶液，调节pH值至6.2-6.8，用蒸馏水定容至100mL；步骤二，酸解总氮THAN的测定：吸取酸解液5mL，置于凯氏瓶中，加入硫酸钾、五水硫酸铜、硒粉的混合粉末0.5g以及2mL浓度为98％的浓硫酸，在硝化炉上温度为200℃下煮30min，待水分完全蒸发后，再在温度为360-410℃下煮2h，至硝化液呈清亮后，用凯氏定氮仪测定，记录盐酸消耗量V1，同时作空白试验，记录盐酸消耗量V01，通过公式计算得到酸解总氮THAN，其中混合粉末中硫酸钾、五水硫酸铜、硒粉的重量比为100∶10∶1；步骤三，酸解氨态氮AN的测定：吸取酸解液10mL，加入2.5mL浓度为3.5％的氧化镁悬浊液或0.072g氧化镁，用凯氏定氮仪测定，记录盐酸消耗量V2，同时作空白试验，记录盐酸消耗量V02，通过公式计算得到酸解氨态氮AN；步骤四，酸解氨基糖态氮ASN的测定：吸取酸解液10mL，加入磷酸-硼砂缓冲液10mL，用凯氏定氮仪测定，记录盐酸消耗量V3，同时作空白试验，记录盐酸消耗量V03，通过公式计算得到酸解氨态氮和氨基糖态氮的总量，用该总量减去步骤三得到的酸解氨态氮AN，即得酸解氨基糖态氮ASN；步骤五，酸解氨基酸态氮ANN的测定：吸取酸解液10mL放入50mL的小烧杯中，加入2mL0.5molL的氢氧化钠水溶液，在100℃水浴下加热直至溶液体积浓缩至2-3mL，冷却后加入1.2g柠檬酸和水合茚三酮混合粉剂，振荡后在100℃下水浴10min，接着加入硼酸-磷酸缓冲液20mL和2mL5molL的氢氧化钠水溶液，将溶液倒入开式管中，用水冲洗小烧杯倒入开式管中，用凯氏定氮仪测定，记录盐酸消耗量V4，同时作空白试验，记录盐酸消耗量V04，通过公式计算得到酸解氨基酸态氮ANN，其中混合粉剂中柠檬酸和水合茚三酮的重量比为5∶1；步骤六，土壤全氮的测定：采用高锰酸钾－铁粉还原凯氏法消煮—自动定氮仪测定，记录盐酸消耗量V5，同时作空白试验，记录盐酸消耗量V05，通过公式计算得到土壤全氮；步骤七，未知态氮HUN的确定：采用酸解总氮THAN依次减去酸解氨态氮AN、酸解氨基糖态氮ASN、酸解氨基酸态氮ANN，即得未知态氮HUN。

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