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申请/专利权人：王泰华

摘要：本发明属于生物提取技术领域，涉及一种乌鳢表皮黏液抗菌肽的制备方法。制备步骤如下：收集乌鳢背部表皮的黏液，进行水浴加热，然后经冷却、离心收集上清液；预冷冻后，冻干得到乌鳢表皮黏液的冻干粉；采用SephadexG‑100凝胶柱对冻干粉进行纯化，然后收集产物在280nm下检测吸光值，收集组分，经冻干得到冻干的组分；再采用阳离子交换柱进一步纯化，收集产物在280nm下检测吸光值，最后收集组分，经透析脱盐、冻干，得到乌鳢表皮黏液抗菌肽；本发明工艺简单且成本较低，对革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌均具有良好的抑制效果，具有广谱抑菌性，可用于制备鱼类防腐剂或饲料添加剂，有助于实现乌鳢加工副产物高值化利用。

主权项：1.一种乌鳢表皮黏液抗菌肽的制备方法，其特征在于，步骤如下：（1）乌鳢前处理：收集乌鳢表皮的黏液，备用；（2）热处理：将步骤（1）收集得到的乌鳢表皮的黏液进行水浴加热，得到热处理的黏液；所述水浴的温度为50~80℃，时间为5~10min；（3）离心：将步骤（2）中热处理的黏液冷却至一定温度后，离心收集上清液；所述冷却至一定温度为5℃以下；所述离心的条件为：离心转速为6000~8000rmin，离心时间为20~40min；（4）冷冻干燥保存：将步骤（3）中收集得到的上清液进行预冷冻后，再采用真空冷冻干燥机进行干燥制粉，得到乌鳢表皮黏液的冻干粉，即为粗提物；（5）采用SephadexG-100凝胶柱对步骤（4）中的冻干粉进行纯化，然后用蒸馏水洗脱，洗脱后收集产物在280nm下检测吸光值，最后收集组分，经冻干处理，得到冻干的组分；所述纯化时上样的样品为冻干粉与蒸馏水的混合溶液，样品浓度为10~20mgmL；所述纯化的柱规格为1.2cm×70cm，流速为0.8-1.2mLmin，上样体积为2-5mL；（6）采用阳离子交换柱对步骤（5）中得到冻干的组分进一步纯化，使用磷酸盐缓冲液线性洗脱，洗脱后收集产物在280nm下检测吸光值，最后收集组分，经透析脱盐、冻干，得到的产物即为乌鳢表皮黏液抗菌肽；所述纯化的柱规格为1.2cm×50cm，流速为0.8-1.5mLmin；所述磷酸盐缓冲液线性洗脱时的洗脱液包括洗脱液A和洗脱液B；所述洗脱液A为40-50mM磷酸盐缓冲液，pH为6.0–6.5；所述洗脱液B是在洗脱液A中加入NaCl，NaCl的终浓度为0.5-1.0M。

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