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申请/专利权人:嘉华药锐科技(北京)有限公司
摘要:本发明涉及一种酪氨酸磷酸化多肽富集方法及其应用,所述富集方法包括:将蛋白样本与DTT、IAM混合孵育;将烷基化处理后的蛋白样本与磁珠混合孵育,进行磁分离后与酶混合,收集多肽样本;将多肽样本与SH2‑琼脂糖珠混合孵育,离心取上清,洗脱,脱盐,即得。本发明采用微量离心柱代替常规离心管进行微量样本pY富集,有效降低实验的复杂程度、缩短实验时间、有效富集pY多肽。
主权项:1.一种酪氨酸磷酸化多肽富集方法,其特征在于,所述方法包括:(1)还原烷基化:将蛋白样本与DTT、IAM混合孵育;(2)蛋白酶切:将烷基化处理后的蛋白样本与SP3磁珠混合孵育,进行磁分离后与酶混合,收集多肽样本;(3)富集:将多肽样本与SH2-琼脂糖珠混合孵育,离心取上清,洗脱,脱盐,即得;步骤(3)所述孵育采用带有筛板的微量离心柱;所述筛板的孔径为25-35μm;步骤(3)所述孵育中多肽样本与离心柱筛板不接触;步骤(2)所述酶包括胰酶;步骤(3)所述洗脱前还包括清洗;所述清洗包括高盐缓冲液和低盐缓冲液依次清洗。
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