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申请/专利权人：嘉华药锐科技(北京)有限公司
摘要：本发明涉及一种酪氨酸磷酸化多肽富集方法及其应用，所述富集方法包括：将蛋白样本与DTT、IAM混合孵育；将烷基化处理后的蛋白样本与磁珠混合孵育，进行磁分离后与酶混合，收集多肽样本；将多肽样本与SH2‑琼脂糖珠混合孵育，离心取上清，洗脱，脱盐，即得。本发明采用微量离心柱代替常规离心管进行微量样本pY富集，有效降低实验的复杂程度、缩短实验时间、有效富集pY多肽。
主权项：1.一种酪氨酸磷酸化多肽富集方法，其特征在于，所述方法包括：（1）还原烷基化：将蛋白样本与DTT、IAM混合孵育；（2）蛋白酶切：将烷基化处理后的蛋白样本与SP3磁珠混合孵育，进行磁分离后与酶混合，收集多肽样本；（3）富集：将多肽样本与SH2-琼脂糖珠混合孵育，离心取上清，洗脱，脱盐，即得；步骤（3）所述孵育采用带有筛板的微量离心柱；所述筛板的孔径为25-35μm；步骤（3）所述孵育中多肽样本与离心柱筛板不接触；步骤（2）所述酶包括胰酶；步骤（3）所述洗脱前还包括清洗；所述清洗包括高盐缓冲液和低盐缓冲液依次清洗。
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权利要求：
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