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申请/专利权人：湖南大学
摘要：本发明属于生物材料技术领域，具体公开了一种提高RHD1与线性泛素链亲和力并保留其特异性的改造方法，本发明基于RHD11‑200aa和线性双泛素结构数据利用生物信息学软件分析其结合界面的氨基酸，选取其中的重要氨基酸位点进行点突变或组合突变，再通过ELISA测定这些突变是否提高其结合线性泛素链的亲和能力，将RHD1发展成一个能够特异识别并高效结合线性泛素链的蛋白配体，为特异性鉴定线性泛素链及其功能研究提供有力工具。
主权项：1.一种提高RHD1与线性泛素链亲和力并保留其特异性的改造方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1：将RHD11-200aa的N端添加识别位点A和纯化标签，按照表达系统的偏好优化其密码子，构入载体A中，获得含RHD11-200aa的氨基酸序列的重组质粒；所述RHD11-200aa的氨基酸序列如SEQIDNO：1所示；步骤2：将Tetra-UbM1-linked的N端添加识别位点B，构入载体B中，获得含有Tetra-UbM1-linked序列的重组质粒；步骤3：在含RHD11-200aa的氨基酸序列的重组质粒中构建RHD1-C13A、RHD1-A92T的点突变或上述点突变的组合突变，实现RHD11-200aa丧失其作为去泛素化酶的功能和仅作为鉴定线性泛素链的蛋白质配体；步骤4：将所述含有Tetra-UbM1-linked序列的重组质粒和进行了步骤3突变的重组质粒在所述表达系统中进行表达和鉴定，获得与Tetra-UbM1-linked具有较强亲和力和特异性的RHD1突变体重组蛋白。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 湖南大学 提高RHD1与线性泛素链亲和力并保留其特异性的改造方法
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